[发明专利]一种糖类抗原CA19-9的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种结合了免疫磁微粒分离技术和化学发光免疫分析技术的糖类相关抗原CA19-9的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法。

背景技术

糖类抗原CA19-9（Carbohydrate Antigen19-9）是细胞膜上的糖脂质，分子量约为1000KD。CA19-9是1979年由Koprowski等用结肠癌细胞免疫小鼠，并与骨髓瘤杂交所得116NS19-9单克隆抗体而命名，是迄今报道的对胰腺癌敏感性最高的标志物。

CA19-9在临床上主要应用在以下方面：

消化道恶性肿瘤

胰腺癌、肝胆系癌、胃癌、结直肠癌的CA 19-9水平分别是正常均值的683、535、279、115倍。而阳性率以胰腺癌为最高，故CA19-9是胰腺癌较好的标志。

胰腺癌诊断中的应用：

大部分胰腺癌患者血清CA19-9水平明显增高。如果以正常参考范围上限（37U/mL）为诊断标准，敏感性和特异性均可达90%以上；CA19-9水平与肿瘤的阶段有关，血清中含量的高低提示手术的难易程度；术前CA19-9水平对预后有一定提示作用，低者预后较好；术后CA19-9水平降至正常者生存期长于未下降者；肿瘤复发时，CA19-9可再度升高，并且发生于影像学诊断之前。因此可用作监测肿瘤的复发。

其他恶性肿瘤

卵巢癌、淋巴瘤、胃癌、肝癌、食管癌、乳腺癌的阳性率较低。应用如下：

胃癌的阳性率约为25%-60%，且与肿瘤分期有关。对于胃癌患者，同时检测CEA可提高阳性率；直肠、结肠癌患者，阳性率为18%-58%，与肿瘤分期有关。同时测定CEA可提高敏感度，如果治疗有效，CA19-9下降速度较CEA快；胆囊癌、胆管癌、胆道癌的CA19-9阳性率较高，可用于区别胰腺癌、胆管癌合并的黄疸与阻塞性黄疸。后者的CA19-9水平较低。

使用原则：CA19-9与AFP、CEA联合检查，有助于提高胃肠道肿瘤的诊断效率。

非肿瘤性疾病

低浓度增高、一过性增高可见于慢性胰腺炎、胆石症、肝硬化、肾功能不全、糖尿病等。

目前用于检测糖类抗原CA19-9的免疫分析方法主要有酶联免疫分析法、化学发光免疫分析法等。酶联免疫分析法存在灵敏度低，线性范围窄、不易实现全自动化等方法学限制因素。化学发光免疫分析法是在酶联免疫分析法基础上发展起来的一种免疫检测技术，具有灵敏度高、检测线性范围宽、操作简便，自动化程度高等优势。目前化学发光免疫分析技术因其有上述诸多有点得到了广泛的应用。

然而，在实际的免疫检测中，由于待测样品中所含的杂质成分较多，一定程度上影响了检测灵敏度和准确性，所以从复杂的样品基质中快速分离、纯化出目的待测物，是临床检验工作者面临的难题之一。

磁微粒免疫检测技术是利用高分子材料合成一定粒度大小的磁性固相微粒作载体，以物理吸附、化学偶联等方法包被上具有特异性亲和力的抗体或抗原等各种免疫活性物质，具有分离速度快、效率高、可重复性好、操作简单、不影响被分离细胞或其他生物材料的生物学性状和功能等特点，在外加磁场作用下可定向运动，使得某些特殊成分得以分离、浓集或纯化。

中国发明专利公开CN101373188A公开了一种了糖类抗原19-9（CA19-9）的定量检测试剂盒，该试剂盒包括CA19-9校准品，包被有CA19-9单克隆抗体的固相载体，辣根过氧化物酶标记的CA19-9单克隆抗体，以及化学发光底物A液、B液，其中所述固相载体为微孔板、塑料珠、塑料管或磁性颗粒。该试剂盒中包被有CA19-9单克隆抗体的固相载体、辣根过氧化物酶标记的CA19-9单克隆抗体构成免疫反应步骤用的免疫反应试剂。该试剂盒虽然能够实现快速、准确地检测，但是其中，包被有CA19-9单克隆抗体的固相载体和辣根过氧化物酶标记的CA19-9单克隆抗体的制备过程非常繁琐，工艺稳定性不好，限制其检测效果特别是分析间精密度和导致成本增加。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种糖类抗原CA19-9的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒，其能够以较低的成本制备得到，且能够实现糖类相关抗原CA19-9准确和高精确地定量测定。

本发明同时还提供一种糖类抗原CA19-9的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒的制备方法，该方法工艺稳定，成本低，且所得试剂盒的精密度高。

一种糖类抗原CA19-9的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：