[发明专利]一种β-内酰胺抗生素中三乙胺残留量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种β-内酰胺抗生素中三乙胺残留量的检测方法。

背景技术

三乙胺是β-内酰胺抗生素合成中广泛使用的试剂，对呼吸道有强烈的刺激性，吸入后可引起肺水肿甚至死亡。相关毒理学资料：急性毒性：LD50460mg/kg(大鼠经口)，570mg/kg(兔经皮)；LC50 6000mg/m³，2小时(小鼠吸入)；刺激性：家兔经眼：250μg(24小时)，重度刺激。亚急性和慢性毒性：兔吸入420mg/m³，7小时/次，每周5次，6周，见肺充血、出血，支气管周围炎，心肌变性，肝肾充血、变性、坏死。生殖毒性：家兔经口最低中毒剂量(TDL0)：6900μg/kg(孕1～3天)，对发育有影响。鉴于三乙胺的安全性问题，根据EMEA相关规定，三乙胺在产品中的残留量限度应为：≤320ppm，即0.032%。

残留溶剂的测定方法一般采用气相色谱法，进样方式有顶空进样和直接进样两种。顶空进样可以避免样品沉积在进样口受高温分解而污染进样口，以及样品的裂解产物在色谱系统中产生干扰峰。但是由于三乙胺的特殊性，在气相的进样管路特别是传输管线存在显著的吸附，导致三乙胺残留量无法有效检测：检出灵敏度很低（0.032%限度的三乙胺不能检出），即使提高浓度后重现性也很差，出峰时间也不固定，主要原因在于三乙胺在管道反复吸附后缓慢洗脱。如果采用将样品溶解后直接进样，由于进样口的高温条件，青霉素、头孢菌素以及大环内酯等抗生素样品沉积在进样口，由于本身性质不稳定，在进样口的高温条件下（进样口温度至少在100℃以上，以保证分析物能够气化分离检测）样品分解产生众多干扰峰，掩盖和干扰三乙胺的检测。由于三乙胺的分子结构特点，也不适合其他分析检测方法如HPLC、IC等。因此，低限度的三乙胺残留量（0.032%以下）检测一直是业内非常棘手的问题。

虽然目前有一些文献报道用顶空气相法测定头孢或大环内酯抗生素中残留的三乙胺，但如果不对进样通道系统进行彻底改造（改成惰性管路），根本无法检测0.032%限度的残留量，然而对成套精密仪器管路的改造绝非易事。另外也有文献报道用氯仿提取三乙胺后直接测定，但氯仿毒性较大，对操作者以及环境的污染都较大，氯仿提取后氯仿层在下面，分液取样困难，而且氯仿出峰位置与三乙胺出峰临近，高浓度的氯仿和残留物都很有可能干扰微量三乙胺的检测。

因此，目前急需一种能够安全有效地检测β-内酰胺抗生素中三乙胺残留量的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从β-内酰胺抗生素中更好地检测三乙胺残留量的方法。

本发明提供了一种β-内酰胺抗生素中三乙胺残留量的检测方法，它是通过气相色谱法进行测定的，具体操作如下：

（1）供试品溶液的制备：

取待测样品，在氢氧化钠或氢氧化钾溶液中溶解，再加甲苯萃取，取上层溶液作为供试品溶液；

（2）标准溶液的制备：

取三乙胺，在氢氧化钠或氢氧化钾溶液中溶解，再加甲苯萃取，取上层溶液作为标准溶液；

（3）将供试品溶液、标准溶液分别注入气相色谱仪中进行测定，其中，色谱条件如下：

进样方式：直接进样；

色谱柱：非极性、弱极性或中等极性填料的毛细管柱；

柱温：30～50℃保持3～10min，按20～60℃/min升温至200℃，保持2min；

检测器温度：150～250℃；

进样口温度：110～200℃。

上述方法中，采用甲苯为溶剂，其毒性较低，提取分离操作更方便，且在气相色谱中不能干扰三乙胺出峰；该方法还采用直接进样，可有效避免三乙胺在顶空进样器中的残留，检测更准确；同时，在改变提取溶剂的情况下，必须采用上述色谱条件进行检测，否则无法得到准确的检测结果。

其中，步骤（1）中，待测样品与甲苯的重量体积比为(0.5～2.0):(0.5～2.0)；步骤（2）中，三乙胺与甲苯的重量体积比为（1.5～6.0）×10^-4：(0.5～2.0)。

其中，步骤（3）中，所述色谱柱尺寸为(20～50)m×(0.32～0.5)mm×(0.25～0.5)μm。