[发明专利]CASP8基因突变检测特异性引物和液相芯片

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种CASP8基因突变检测特异性引物和液相芯片。

背景技术

CASP8(apoptosis-related cysteine peptidase)基因的全称是半胱氨酸蛋白酶(apoptosis-related cysteine peptidase)基因，简写为CASP8或caspase8，是一种编码蛋白型基因，属于半胱氨酸蛋白酶caspase(cysteine-aspartic acid protease caspase)家族，该基因定位于人2号染色体的长臂33-34，DNA全长2938bp，是单外显子基因，外显子位于202-1818bp处，mRNA全长2097bp，其中编码序列1998bp，编码665个氨基酸、分子量为73Kd的驱动蛋白样DNA结合蛋白(kinesin-like DNA binding protein，kinesin-like4，Kid)。CASP8是CASP家族的第8个成员，因此也被命名为caspase8(caspase family8)。该家族作为非活化的蛋白酶原，由一系列蛋白结构域，大小蛋白酶亚基组成的，在细胞凋亡活化的执行期起重要作用。其中CASP8需要由在保守氨基酸末端的蛋白水解过程中产生的二聚酶来激活。它的基因编码产物由Fas和多种不同的细胞凋亡激活因子诱导，研究表明，caspases对免疫细胞的生死存亡起决定性作用，其表达或激活异常与包括肿瘤在内的多种疾病有关。caspase-8由CASP8基因编码，它是死亡配体-受体相互作用介导的细胞凋亡过程的起始型caspase。来自死亡配体与受体结合的凋亡信号，首先激活caspase-8，后者将凋亡信号传递给caspase-10(由CASP10基因编码)引起caspase级联反应导致细胞凋亡。在该过程中，CFLAR(由CFLAR基因编码)对caspase-8起负调节作用。这三个凋亡相关分子在凋亡信号传导过程共同作用，是细胞凋亡事件中的关键分子。据研究发现，CASP8基因与多种常见肿瘤，包括头颈部鳞状细胞癌、脑膜瘤、膀胱癌、肺癌、食管癌、结直肠癌、子宫颈癌、乳腺癌的发生风险呈现相关性。

目前，CASP8基因突变检测方法主要有：Illumina光纤微珠芯片技术、PCR-RFLP技术、SNPlexTM System技术和荧光定量PCR技术，虽然Illumina光纤微珠芯片技术是高灵敏度和精确性的高通量检测系统，但是自动化程度低，手工操作比较多，难以满足实际应用的需要，PCR-RFLP法是基于基因突变造成的限制性内切酶识别位点的改变，如位点丢失或产生新位点，通过PCR扩增某一特定片段，再用限制性内切酶酶切扩增产物，电泳观察片段的大小，

这种方法用于检测酶切位点改变的基因突变，可直接判断基因型，但该法不能用于没有产生新酶切位点的基因突变检测。SNPlexTM System技术对SNP序列特异性要求较高，不能随意地分析所选择的单核苷酸多态性位点，难以应用于临床检测诊断，而且该方法操作比较复杂，不能满足实际应用的需要。而荧光定量PCR技术灵敏度高、特异性强、自动化程度高的特点，但存在样品易污染、假阳性率高的缺点，且每次只能检测一种突变类型，同样不能满足实际应用的需要。

本发明目标检测的CASP8基因突变，如表所示：

序号CASP8基因突变的内容标记为1SEQ ID NO.57的第158位核苷酸开始，发生了6bp缺失缺失突变

SEQ ID NO.57CASP8基因缺失突变