[发明专利]一种体外诱导扩增NKT细胞的方法

权利要求书

1.一种体外诱导扩增NKT细胞的方法，其特征在于该方法由以下步骤组成：

a.IL-2和GM-CSF共培养DC细胞，

b.α-GalCer对DC细胞的负载，

c.用α-GalCer负载的DC细胞培养NKT细胞。

2.如权利要求1所述的体外诱导扩增NKT细胞的方法，其特征在于所述的IL-2和GM-CSF共培养DC细胞由以下步骤组成：用淋巴细胞分离液分离初外周血单个核细胞，用1640培养液调整PBMC浓度为2~4×10⁶/mL，置于37℃、5%的CO₂培养箱，用1640培养液洗板2次，加入含有IL-2，GM-CSF的培养液，置于37℃、5%的CO₂培养箱2小时。

3.如权利要求1所述的体外诱导扩增NKT细胞的方法，其特征在于所述的α-GalCer对DC细胞的负载由以下步骤组成：保存5天后，在培养的DC细胞中加入α-GalCer，24小时后收集细胞。

4.如权利要求1所述的体外诱导扩增NKT细胞的方法，其特征在于α-GalCer负载的DC细胞培养NKT细胞由以下步骤组成：用含有IL-2、IL-15和α-GalCer的培养液调整洗板后的悬浮淋巴细胞浓度至1~2×10⁶ /ml，在37℃、5%的CO₂培养箱中培养5天；在第3~4天进行补液及传代；其中第0天、7天、14天加入DC细胞共培养，第21天收获细胞。

5.如权利要求1或2或3所述的体外诱导扩增NKT细胞的方法，其特征在于所述的IL-2的浓度为100U/ml。

6.如权利要求1或2或3所述的体外诱导扩增NKT细胞的方法，其特征在于所述的GM-CSF浓度为50ng/ml。

7.如权利要求1或3所述的体外诱导扩增NKT细胞的方法，其特征在于所述的α-Galcer浓度为100ng/ml。

8.如权利要求4所述的体外诱导扩增NKT细胞的方法，其特征在于步骤（c）中，IL-2的浓度为50U/ml。

9.如权利要求4所述的体外诱导扩增NKT细胞的方法，其特征在于步骤（c）中，IL-15的浓度为50ng/ml。

10.如权利要求4所述的体外诱导扩增NKT细胞的方法，其特征在于步骤（c）中，α-Galcer的浓度为50ng/ml-500ng/ml。