[发明专利]一种早期诊断膀胱癌的试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种膀胱癌患者尿液中的肿瘤标志物的检测方法，该方法通过定量检测存在于尿液中异常糖基化的整合素AG-α3β1含量，无创性地实现膀胱癌的早期诊断。

背景技术

膀胱癌为泌尿系最常见的恶性肿瘤，发病率在美国被列为男性恶性肿瘤的第四位，女性为第八位，居恶性肿瘤的第七位。在我国发病率泌尿系肿瘤第一位。膀胱癌约95％来源于膀胱上皮，绝大多数为恶性，只有少数为良性，包括乳头状瘤、移行细胞癌、鳞状细胞癌和腺癌。其中以移行细胞癌最常见，占80％以上。目前手术治疗、放疗和化疗的疗效并不令人满意，患者5年存活率在40％-60％。预后较差和极易复发是膀胱癌的最大特点，有效的治疗很大程度上依赖于对膀胱癌的早期发现和早期治疗。然而，膀胱癌发病隐匿，大部分患者都是因为肉眼或镜下血尿怀疑膀胱癌才会到医院就诊，而出现肉眼血尿往往已是癌症晚期。所以寻找特异的膀胱癌早期诊断方法具有重要的临床应用价值。

目前，膀胱癌的早期诊断方法有以下几种：

1)尿液分析：血尿出现后首先便是进行尿液分析，以便排除是否是由于尿路炎症引起，并不能确定患者是否患膀胱癌；

2)尿脱落细胞分析：对尿沉渣中的尿脱落细胞进行显微镜下观察，可以鉴别并区分恶化的肿瘤细胞和正常细胞。但灵敏度不高，且差异较大，早期膀胱癌容易漏检；

3)超声、CT或者MRI成像观察：对肿瘤的大小和恶化程度可以直接进行图像观察，准确度较前面方法大大提高。尽管近年来成像技术的不断进步，灵敏度不断提高，但对较小的肿瘤观察仍然不够，易漏检；

4)膀胱镜观察：膀胱镜通过尿路进入膀胱，进行可视化的观察，从而发现早期的肿瘤并取活检。但该方法是一种有创性检查，不能用于膀胱癌早期筛查环节。

目前早期诊断膀胱癌细胞特异性最高的是通过膀胱镜的观察，荧光膀胱镜的应用提高了检测灵敏度。但患者一般需要经常性的跟踪观察，从而能及早发现肿瘤，或者跟踪治疗中的疗效及复发状况的观察。然而，膀胱镜观察会对患者造成身体不适。另外，目前荧光膀胱镜检测所需荧光染料特异性不高，且对人体有一定的负面影响。因此，在膀胱癌的早期诊断方面，人们一直在探索更特异和更灵敏的检测方法，尽可能的利用特异的肿瘤标志物实现方便、快速的检测。

实现尿液中膀胱癌标志物或者细胞的检测，进行实时检测在临床诊断方面具有重要的应用价值。目前商业化的可用的膀胱癌的标志物有：人补体因子H相关蛋白(膀胱肿瘤抗原，BTA试剂盒)、高分子量的癌胚抗原和两个膀胱癌细胞相关的粘附分子(美国Scimedx Corp公司的Immunocyt试剂盒)、核基质蛋白22(NMP22)、3、7和17号染色体的异倍体以及P16肿瘤抑制因子9p21位点的缺失(UroVysion试剂盒)。BTA是指人补充因子H相关蛋白，BTA检测需要专业操作人员在标准实验室进行。灵敏度达到57-83％，特异性60-92％，血尿患者的特异性只能达到46％，另外良性前列腺增生、肾结石以及尿路感染等情况均影响BTA检测的特异性；Immunocyt试剂盒通过免疫荧光检测尿脱落细胞，尽管灵敏度以及特异性很高，但为了达到较高的准确性需要进行大量的尿脱落细胞检测，因此在膀胱癌患者的治疗以及预后观测方面具有很高的应用价值，但应用在早期诊断方面差强人意；其中NMP22是目前应用最广的膀胱癌标志物，ELISA试剂盒的市场化实现了膀胱癌早期诊断的方便、快捷检测，检测灵敏度和特异性也很高，但是在有病毒感染、肾/膀胱结石等情况下，仍会出现假阳性；UroVysion试剂盒采用的是多靶标的荧光原位杂交(FISH)技术，尽管灵敏度与特异性得到极大提高，美国FDA批准，但与Immunocyt试剂盒类似，需要进行大量的尿脱落细胞检测。

结合目前的膀胱癌标志物的应用以及膀胱癌的诊断现状，我们得出：一方面，新的特异的膀胱癌仍是研究的重点；制备早期诊断试剂盒，实现快速、高通量检测，在膀胱癌的早期筛查及预后方面具有重要的临床价值。

因此，选用高特异性、高灵敏性且无创伤性的检测方法对膀胱癌的早诊、早治有重要意义。

发明内容