[发明专利]一种纳米金-多肽生物探针及制备和应用方法

权利要求书

1.一种纳米金-多肽纳米生物探针，其特征在于，将多肽组装在纳米金颗粒表面，在暗场显微镜下可直接观察到该纳米生物探针，将制备的此探针与细胞共培养后，可利用暗场显微镜观察细胞内部及表面的纳米金生物探针的数量、分布、形态以及其他的相互关系和作用。

2.根据权利要求1所述一种纳米金-多肽纳米生物探针，其特征在于，所述纳米金为还原法制备的胶体金颗粒，其颗粒直径为15～70纳米。

3.根据权利要求1所述一种纳米金-多肽纳米生物探针的制备及应用方法，其特征在于，包括以下步骤：

将原料溶液加入到烧瓶中，加热并冷凝回流至沸腾；

沸腾溶液中快速加入还原剂溶液，持续搅拌，观察颜色变化，颜色稳定无变化时，停止加热，形成溶液液I；

溶液I继续搅拌室温过夜后，过滤；

由步骤（3）制备的纳米金溶液中加入碱性溶液A，调节pH值；

向步骤（4）得到的溶液中加入多肽溶液，混合均匀，进行组装； 

同样条件下，向由步骤（3）制备的另一组纳米金溶液中加入封闭剂；

溶液离心，去上清，用双蒸水重悬浮，洗涤过程重复三次；

洗涤后的纳米金生物探针用细胞培养液重悬浮；

将处理后的纳米金生物探针加入到细胞培养皿中，于37℃，5.0%二氧化碳的细胞培养箱中与细胞共培养；

将细胞用缓冲液洗涤后，用暗场显微镜观察，可以选择如下方法中的一种：

将细胞用多聚甲醛或甲醛固定后，即可通过暗场显微镜直接观察到细胞形态以及表面或内部的纳米金-多肽生物探针；

将细胞洗涤后，直接将活细胞通过暗场显微镜观察到活细胞形态以及其内部或表面连接的纳米金-多肽生物探针。

4.根据权利要求3所述一种纳米金-多肽纳米生物探针的制备及应用方法，其特征在于，所述的原料溶液为0.01%的氯金酸水溶液10～500毫升。

5.根据权利要求3所述一种纳米金-多肽纳米生物探针的制备及应用方法，其特征在于，所述还原剂可为柠檬酸三钠、抗坏血酸、鞣酸、硼氢化钠中的一种，所述还原剂的浓度为1%，加入量为0.05～10毫升。

6.根据权利要求3所述一种纳米金-多肽纳米生物探针的制备及应用方法，其特征在于，步骤（4）所述碱性溶液A为氢氧化钠、碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾水溶液中的一种，浓度为0.1～2M；所述调节后的溶液pH值为8～10。

7.根据权利要求3所述一种纳米金-多肽纳米生物探针的制备及应用方法，其特征在于，步骤（5）所述多肽为N端标记有一个半胱氨酸；所述多肽溶液的浓度为25??M，体积为20～100微升。

8.根据权利要求3所述一种纳米金-多肽纳米生物探针的制备及应用方法，其特征在于，步骤（6）所述封闭剂为0.1～2% PEG6000水溶液，或0.1～2%酪蛋白溶液。

9.根据权利要求3所述一种纳米金-多肽纳米生物探针的制备及应用方法，其特征在于，步骤（7）所述离心条件为：12000～5000rpm/min，5分钟，4℃。

10.根据权利要求3所述一种纳米金-多肽纳米生物探针的制备及应用方法，其特征在于，所述纳米金生物探针表面组装的多肽可特异性识别细胞表面的受体；步骤（9）所述纳米金-多肽纳米生物探针与细胞共培养时间为30～120分钟。