[发明专利]一种与乳腺癌脑转移细胞特异性结合的多肽

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于治疗肿瘤的多肽，特别是一种与乳腺癌脑转移细胞特异性结合的多肽，本发明还涉及制备该多肽的方法，以及该多肽在制备治疗乳腺癌脑转移药物、制备用于乳腺癌脑转移早期诊断试剂盒上的应用。

背景技术

乳腺癌是一种严重危害女性健康的恶性肿瘤。全球乳腺癌患病率和死亡率均居女性恶性肿瘤首位，占所有女性癌症病例数的23%和癌症死亡数的14%。乳腺癌发展到晚期的典型表现是远处扩散转移，主要转移到骨骼和脑等部位。其中，乳腺癌脑转移的发生率占转移病例的10%-16%。近年来，随着患者生存期的延长和影像诊断技术的发展，乳腺癌脑转移的检出率逐年提高。但是，现有的药物不能有效控制和治疗乳腺癌脑转移。

近年来，抗体药物治疗肿瘤受到广泛的关注，在治疗乳腺癌方面，单克隆抗体类药物—赫赛汀，对Her-2阳性的转移性乳腺癌有较好的疗效。对于Her-2阳性的乳腺癌患者，放疗联合赫赛汀治疗是标准治疗方法。但是，在诊断出远处转移灶前使用赫赛汀非但不能有效抑制脑转移发生，还会使脑转移的相对危险度提高1.57倍。据报道，在诊断出乳腺癌脑转移之后，50%的患者对化疗敏感，转移症状稳定，但是有一半患者死于进行性脑转移。赫赛汀在脑部有效性较差可能由于赫赛汀对血脑屏障渗透性较低。在脑脊液中赫赛汀的水平仅是注射剂量的1/420,放疗后浓度增加到1/49-1/76，但仍然不能达到有效治疗水平。

多肽药物分子量小、活性高、穿透力强、亲和力高、特异性高、毒性低，可以克服上述抗体治疗中存在的问题，目前还没有靶向治疗乳腺癌脑转移的多肽类药物。因此，发现能与乳腺癌脑转移细胞特异性结合的多肽，对乳腺癌脑转移的早期诊断和有效治疗具有极其重要的应用价值。专利CN101068935A公开了新的人基因B1194，A2282V1，A2282V2和A2282V3，它们的表达在乳腺癌中显著增加，这些基因及其编码的多肽可用于例如诊断乳腺癌，并作为开发抗乳腺癌药物的靶分子。专利CN101334411A公开了作用于治疗CXCR4受体介导的乳腺癌的多肽药物的筛选、修饰方法、标记及其应用。两篇专利文献虽然都是与治疗乳腺癌有关的多肽，但都未提及能和乳腺癌脑转移细胞特异性结合。

发明内容

发明目的：背景技术中提到虽然有专利文献涉及与治疗乳腺癌有关的多肽，但未提及能和乳腺癌脑转移细胞特异性结合的多肽，本发明的目的在于提供一种能与乳腺癌脑转移细胞特异性结合，还具有良好的肿瘤靶向性、可内化进入细胞的多肽。

本发明的另一个目的在于提供制备与乳腺癌脑转移细胞特异性结合的多肽的方法。

本发明的另一个目的是提供上述多肽在制备用于治疗乳腺癌药物的应用。

本发明的另一个目的是提供上述多肽在制备用于乳腺癌脑转移早期诊断的试剂盒的应用。

技术方案：本发明的目的是通过如下技术方案来实现的。

本发明制备与乳腺癌脑转移细胞特异性结合的多肽，利用噬菌体展示技术，以乳腺癌脑转移细胞系MDA-231BR作为正筛细胞，以乳腺癌亲代细胞系MDA-231P作为负筛细胞，进行多轮全细胞消减筛选，筛选出与乳腺癌脑转移细胞特异性结合的噬菌体克隆。

噬菌体单克隆化后通过细胞ELISA初步鉴定120个噬菌体克隆与细胞结合特性，选取P/N值大于3的强阳性克隆进行测序，成功测序的22个噬菌体克隆共发现3种序列，将其中占有绝对优势的噬菌体克隆的氨基酸序列命名为BrBP1，经测序，其基因序列如SEQ IDNO:1所示，将所测的BrBP1序列经过人工合成方法得到与乳腺癌脑转移细胞特异性结合的BrBP1多肽。

本发明通过ELISA鉴定噬菌体克隆与多种细胞系的结合，证实了噬菌体克隆与乳腺癌脑转移细胞结合的特异性，通过竞争抑制实验进一步鉴定噬菌体克隆与乳腺癌脑转移细胞结合的特异性。

本发明还分别从体外细胞水平和体内水平鉴定了噬菌体克隆与靶细胞结合的特异性。

本发明还进一步证实了所述多肽可内化进入细胞，且呈现孵育时间依赖性。

本发明所述的多肽可内化进入细胞，偶联抗肿瘤药物后可进入肿瘤细胞内杀伤靶细胞，大大增强抗肿瘤效果，可用于制备治疗乳腺癌药物。

本发明所述的多肽通过与乳腺癌脑转移细胞特异性结合，可制备试剂盒用于乳腺癌脑转移早期诊断。

有益效果：与现有技术相比，本发明的有益效果有，

1、本发明筛选得到了一种与乳腺癌脑转移细胞特异性结合的多肽，填补了目前缺乏与乳腺癌脑转移细胞结合的多肽的空白；