[发明专利]冬虫夏草中国被毛孢氨甲酰磷酸合成酶、编码基因及应用有效
| 申请号： | 201210535384.8 | 申请日： | 2012-12-10 |
| 公开（公告）号： | CN103031281A | 公开（公告）日： | 2013-04-10 |
| 发明（设计）人： | 郑裕国;柳志强;吴晖;李邦良;吴玲芳;许静;许峰;薛亚平;袁水金;王鸿艳 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学;杭州中美华东制药有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/00 | 分类号： | C12N9/00;C12N15/52;C12N1/21;C12P13/00;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟;王兵 |
| 地址： | 310014 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 冬虫夏草 中国 被毛孢氨甲酰 磷酸 合成 编码 基因 应用 | ||
1.一种冬虫夏草中国被毛孢氨甲酰磷酸合成酶，其特征在于所述酶具有SEQ ID No.1所示氨基酸序列90%以上的同源性。
2.如权利要求1所述冬虫夏草中国被毛孢氨甲酰磷酸合成酶，其特征在于所述酶的氨基酸序列为SEQ ID No.1所示。
3.一种权利要求1所述冬虫夏草中国被毛孢氨甲酰磷酸合成酶在生物催化L-谷氨酸制备氨甲酰磷酸中的应用。
4.如权利要求3所述的应用，其特征在于所述的应用为：以含冬虫夏草中国被毛孢氨甲酰磷酸合成酶的菌体发酵培养后获得的湿菌体进行细胞破碎后制备的细胞破碎混合液为催化剂，以L-谷氨酸为底物，在ATP及碳酸氢钠的作用下，于缓冲溶液的转化体系中进行转化反应，获得氨甲酰磷酸。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述的应用为：以含冬虫夏草中国被毛孢氨甲酰磷酸合成酶的菌体发酵培养后获得湿菌体进行细胞破碎后制备的细胞破碎混合液为催化剂，以L-谷氨酸为底物，在ATP及碳酸氢钠的作用下，于pH为6.5~8.5的缓冲溶液的转化体系中，在30℃、150rpm条件下转化反应2~3h，反应结束后，将反应液过滤，取滤液即为含氨甲酰磷酸的粗品，所述粗品分离纯化获得氨甲酰磷酸。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于所述底物的初始浓度为10g/L，所述催化剂的体积用量为100mL/g底物，所述催化剂的干菌体浓度为6.7mg/mL，所述ATP、碳酸氢钠与底物的质量比为1:1:1。
7.一种编码权利要求1所述酶的基因。
8.如权利要求7所述基因，其特征在于所述基因具有SEQ ID No.2所示核苷酸序列95%以上同源性。
9.如权利要求8所述基因，其特征在于所述基因的核苷酸序列为SEQ ID No.2所示。
10.如权利要求7~9之一所述基因在构建能够生物催化L-谷氨酸制备氨甲酰磷酸的基因工程菌中的应用，其特征在于所述的应用为：构建含有所述冬虫夏草中国被毛孢氨甲酰磷酸合成酶基因的重组载体，将所述重组载体转化至大肠杆菌中，获得的重组基因工程菌进行诱导培养，培养液分离纯化获得含有冬虫夏草中国被毛孢氨甲酰磷酸合成酶的菌体细胞。
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