[发明专利]人源抗人血管内皮细胞生长因子抗体及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及治疗用人源基因工程抗体的制备及应用，主要是特异性针对新生血管尤其是特异性针对恶性肿瘤和视网膜病变中新生血管形成的关键因子VEGF，具有抑制肿瘤和其他新生血管形成相关疾病中VEGF的生物学活性，从而达到抑制恶性肿瘤生长和转移及各种眼内新生血管性病变的治疗或诊断用基因工程抗体。 

背景技术

新生血管形成牵涉各种病症的病理发生过程，包括实体瘤、增生性视网膜病变、与年龄相关的黄斑退行性病变、关节炎和银屑病。实体瘤中，新生血管发生使肿瘤细胞获得有利的生长环境和自我增殖的能力。大量研究证实VEGF在正常和病理性血管发生中具有重要的调节作用，发现即使VEGF单等位基因的缺失也会导致胚胎死亡，说明，其在血管系统发生及分化过程中具有不可替代的作用。进而研究证实，VEGF是肿瘤和视网膜病变中新生血管形成的关键因子。糖尿病及其他局部缺血相关的视网膜病变病人的眼液中VEGF浓度与血管快速增殖现象具有高度相关性。抗VEGF中和抗体抑制裸鼠内各种肿瘤细胞系的生长并抑制缺血性视网膜病症模型的血管发生。因此，抗VEGF单克隆抗体或VEGF其他抑制剂在实体瘤及各种眼内新生血管性病变的治疗中将具有良好的应用前景。 

针对VEGF信号通路的药物研究进展迅速（Sharma PS et al.,2011;Bagri A et al.,2010），主要集中在针对VEGF-A和VEGFR2两个分子上。VEGF与VEGFR2结合，可以明显促进内皮细胞的增殖、分化和迁移，进而促进血管发生。中和抗体通过抑制其与受体的结合，抑制VEGF的生物学功能，从而达到抑制肿瘤或病理性血管发生的目的。 

2004年，针对VEGF靶标的治疗用人源化抗体贝伐单抗（阿伐斯汀，商品名阿伐斯汀，即阿伐斯汀）经FDA批准上市，用于治疗结肠癌，其后又陆续被批准用于治疗非小细胞型肺癌、肾细胞癌、乳腺癌和恶性胶质瘤(Hurwitz H et al.,2001;Miller K et al.,2007;Cohen MH et al.,2009;Summers J et al.,2010)，目前其年销售额已经超过60亿美元。另一株上市的人源化Fab抗体ranibizumab也于2006年批准上市，用于治疗湿性视黄斑变性(Rosenfeld PJ et al.,2006)。而处于临床和临床前研究阶段的针对VEGF的抗体类药物也有很多，其中VEGF受体胞外片段与免疫球蛋白的Fc片段融合蛋白VEGF-Trap已经进入III期临床(Bagri A et al.,2010;Holash J et al.,2002;Lockhart AC et al.,2010)。VEGF的受体主要包括VEGFR1、VEGFR2和VEGFR3。一般认为，VEGFR2是VEGF-A 通路是抗血管发生治疗的主要靶向，目前，针对VEGFR2的抗体药物包括：全人源抗体remucirumab(Spratlin JL et al.,2010;Posey J A et al.,2003;Spratlin J et al.,2011)和人源化抗体DC101/IMC-1C11等(Cabebe E&Wakelee H,2007)。 

人源抗体是治疗性抗体发展的最新发展方向。人抗体库技术和人抗体转基因小鼠技术是目前获得人源抗体的两个重要途径，两者各具特色。与转基因小鼠相比，抗体库技术突破了抗体体内制备的限制，使抗体的研制简单、快速而且便捷。然而，就目前的发展现状而言，抗体库技术成功的案例与转基因小鼠相比还有一定的差距。但是，抗体库技术也为抗体的改造提供了强大的技术支持，它使得治疗性抗体的获得和改造比之前任何时候都更容易。尤其是在针对一些通过免疫很难获得较好效果的靶标抗原特异性抗体的研制方面，抗体库技术具有明显的优势。目前已经有两株来自抗体库技术的抗体被批准上市，另有多株抗体处于临床研究阶段，充分证实抗体库技术的巨大的实用价值。