[发明专利]检测食品中乳酸菌的方法及检测用引物

权利要求书

1.检测食品中乳酸菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）提取食品中细菌基因组DNA；

（2）对步骤（1）提取的DNA进行PCR扩增，其中所使用的引物对是兼并引物对；

（3）将步骤（2）的PCR扩增的产物进行电泳检测；如检测到唯一PCR扩增条带，则检测结果为阳性，否则检测结果为阴性；如检测结果为阳性则不需要进行步骤（4），如检测结果为阴性则需要进行步骤（4）；

（4）任选对步骤（2）的PCR扩增的产物进行测序。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述食品是酸奶。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乳酸菌是嗜酸乳杆菌、双歧杆菌、嗜热乳链球菌、保加利亚乳杆菌、双歧乳杆菌、干酪乳杆菌、嗜酸乳酸菌、两歧双歧杆菌、乳双歧杆菌和长双歧杆菌中的一种或多种。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述引物对中的引物选自SEQ IDNO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ IDNO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述引物对中的正向引物选自SEQID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4。

6.如权利要求1或5所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述引物对中的反向引物选自SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述PCR扩增的体系采用TakaraDRR006A Ex Taq Hot Start Version试剂盒，如下：

TaKaRa Ex Taq HS（5U/μl）0.25μl

10×Ex Taq Buffer（Mg²⁺Plus）5μl

dNTP Mixture（各2.5mM）4μl

正向和反向引物（各20μM）各0.5μl

细菌基因组提取液中的DNA50ng

加水定容至50μl；

所述PCR扩增条件为：95℃2min预变性；95℃30s，55℃30s，72℃40s，45个循环；72℃延伸5min。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（3）中，如果PCR扩增的产物经电泳检测是大小为250-300bp的唯一一条PCR扩增条带，则检测结果为阳性，不进行步骤（4）；如果出现该条带的同时也出现了其他条带，则检测结果为阴性，进行步骤（4）。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（4）中，所述测序是illumina genome analyzer测序。

10.用于检测食品中乳酸菌的引物或引物对，其特征在于，所述引物选自SEQ ID NO.1、SEQID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10，其中引物对中的正向引物选自SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4，其中引物对中的反向引物选自SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10。

11.如权利要求10所述的引物或引物对在检测食品中乳酸菌的方法中的应用。