[发明专利]一种用于驴精液冷冻保存的鸭蛋卵黄抗冻剂及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是指一种用于驴精液冷冻保存的鸭蛋卵黄抗冻剂及其制备方法。

背景技术

精液冷冻保存与人工授精技术相结合，在现代畜牧业生产中发挥着巨大的作用，能大量减少公畜的饲养数量，降低生产成本，提高优秀种公畜的利用率，为畜牧业带来巨大的经济效益。现阶段，驴繁殖主要采用本交方式，个别技术好的畜牧改良员有时也将采出的精液（鲜精）不稀释或低倍稀释（1∶2～4），立即给发情母驴输精，它适用于母驴季节性发情较明显，而且数量较多的地区。与本交相比，效率可提高5－20倍。但由于我国驴品种较多，养殖区分布较广，多在山区或交通不便区域，且饲养方式多以散户居多，母驴分布不集中，鲜精或低倍稀释的精液人工授精技术推广面积较少。此外，由于驴鲜精体外保存时间极短，几小时后活力近乎丧失，这使得驴的鲜精人工授精技术受到时间、地点的极大限制。因此，畜牧生产中迫切需要保存时间更长、携带更为方便的优质公驴精液来改良全社会的驴生产群体。

精液保存分为常温（15℃～25℃）保存、低温保存（0℃～5℃）和冷冻（－79℃～－196℃）保存三种方法。常温保存技术研究开展的最早，相对比较成熟，但在常温下，一方面微生物生长迅速会影响精液质量，另一方面常温保存时精子活力下降较快。低温保存技术相对冷冻保存而言操作简单方便，成本低，但低温保存技术需要既能提供营养又能保护精子的非渗透性低温保护剂及稀释液。冷冻保存是指将精液经过特殊处理后置于液氮或干冰中，可保存该物种种质资源数年甚至数十年，切实发挥良种公畜的遗传资源。但由于不同公畜精子的生物学特性不同，其冷冻保存效果也存在很大的差别。如牛精液的冷冻保存技术比较成熟，尤其牛精液细管法程序生产已经普及；但羊精子冻后普遍存在情期受胎率不稳定、受胎率低、重复率低等诸多问题；而猪的精子因含脂量较高，脱水比较困难，冷冻-解冻后精子存在超微结构受到损伤（如精子膜、顶体和精子核泡化、损伤或破裂）、在雌性生殖道内寿命缩短和受精率低等问题，因而猪精液冷冻保存还一直处于试验阶段。目前国内外关于驴精液冷冻保存的研究很少，主要原因是：一方面是驴的繁殖率低，妊娠期长；第二，由于不同的驴个体间其精液品质有明显的差异，且驴精子本身对低温打击特别敏感，在冷冻解冻过程中极易损伤，因而冷藏和冷冻后的精液极大地降低了受胎率；第三，由于驴发情时间长，人工授精的时机掌握不准确造成其妊娠率低；最后，公驴每次平均射精量多达70ml，密度较稀，且精清中的电解质成分会促进精子早衰。因而，驴的冷冻精液生产操作程度复杂，难度大，严重制约着冷冻精液的应用。

驴为马属动物，分布其广，遍及亚、非、拉各大洲。我国的德州驴，体格高大，结构匀称，中外驰名，是改良小型驴种及作为种间杂交的一个理想品种。因此生产中亟需进行德州驴精液的冷冻保存研究。

发明内容

本发明提出一种用于驴精液冷冻保存的鸭蛋卵黄抗冻剂，解决了现有技术中母畜繁殖周期长、人工授精受胎率低，驴的冷冻精液生产操作程度复杂，难度大的问题。

本发明的技术方案是这样实现的：

一种用于驴精液冷冻保存的鸭蛋卵黄抗冻剂，每100mL抗冻剂中包括下列组分：

Tris 3～4g、葡萄糖1～2.5g、柠檬酸1.5～3.0g、甘油5～10mL、卵黄10～30mL、青霉素45～55万IU、链霉素4.5～5.5万IU、余量为蒸馏水。

作为优选的技术方案，一种用于驴精液冷冻保存的鸭蛋卵黄抗冻剂，每100mL抗冻剂中包括下列组分：

Tris 3.5g、葡萄糖1.5g、柠檬酸2.0g、甘油7mL、卵黄20mL、青霉素50万IU、链霉素5万IU、余量为蒸馏水。

本发明提出又一种制备用于驴精液冷冻保存的鸭蛋卵黄抗冻剂的方法，包括步骤：

1）按照每100mL抗冻剂中包含Tris 3～4g、葡萄糖1～2.5g、柠檬酸1.5～3.0g、甘油5～10mL、卵黄10～30mL、青霉素45～55万IU、链霉素4.5～5.5万IU、余量为蒸馏水，称取各组分，备用；

2）将上述称取的Tris、葡萄糖、柠檬酸用蒸馏水配置成基础液；

3）向上述配置成的基础液中添加步骤1）中称取的青霉素钠和硫酸链霉素配置成Ⅰ液；

4）将所述Ⅰ液整pH为7.1～7.8，然后进行过滤灭菌，放入3～5℃冰箱中备用；

5）使用前取所述Ⅰ液，向其中加入步骤1）中称取的卵黄，配置成Ⅱ液，即得所述用于驴精液冷冻保存的鸭蛋卵黄抗冻剂。