[发明专利]一种检测中外不同牛群体的基因诊断方法在审

申请号：	201210528854.8	申请日：	2012-12-10
公开（公告）号：	CN103031376A	公开（公告）日：	2013-04-10
发明（设计）人：	陈宏;黄永震;王珂忆;蓝贤勇;雷初朝;胡沈荣	申请（专利权）人：	西北农林科技大学
主分类号：	C12Q1/68	分类号：	C12Q1/68
代理公司：	暂无信息	代理人：	暂无信息
地址：	712100 ***	国省代码：	陕西;61
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摘要：
搜索关键词：	一种检测中外不同牛群基因诊断方法
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【权利要求书】：

1.一种检测黄牛GLI3基因单核苷酸多态性的方法，其特征在于，

(1)以包含GLI3基因的待测黄牛全基因组DNA为模板，以引物对P为引物，PCR扩增黄牛GLI3基因，

所述的引物对P为：

上游引物：5’-CAGGGGAAAAGGATGGG-3’；

下游引物：5’-CGAGGTAAGTGCACATGC-3’；

(2)用琼脂糖凝胶电泳检测步骤(1)中PCR扩增产物片段大小；

(3)用变性剂处理步骤(1)中PCR扩增产物之后，再对变性后的扩增片段进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据聚丙烯酰胺凝胶电泳结果鉴定黄牛GLI3基因第8143位的单核苷酸多态性。

2.如权利要求1所述的检测黄牛GLI3基因单核苷酸多态性的方法，其特征在于，步骤(1)所述的PCR扩增反应程序为：

95℃预变性4min；94℃变性30s，58.5℃退火30s，72℃延伸30s，34个循环；72℃延伸10min。

3.如权利要求1所述的检测黄牛GLI3基因的单核苷酸多态性的方法，其特征在于，所述的琼脂糖凝胶电泳为质量浓度为1.5%的琼脂糖凝胶电泳。

4.如权利要求1所述的检测黄牛GLI3基因的单核苷酸多态性的方法，其特征在于，所述的聚丙烯酰胺凝胶电泳为质量浓度10%的聚丙烯酰胺凝胶电泳。

5.如权利要求1所述的检测黄牛GLI3基因单核苷酸多态性的方法，其特征在于，所述步骤(3)中根据聚丙烯酰胺凝胶电泳结果鉴定黄牛GLI3基因第8143位的单核苷酸多态性为：AA基因型表现为8143位为核苷酸A纯合；AG基因型表现为8143位为核苷酸A/G杂合；GG基因型表现为8143位为核苷酸G纯和；其中，单核苷酸多态性GG基因型为突变纯合基因型。

6.权利要求1-5中任意一权利要求所述的检测黄牛GLI3基因单核苷酸多态性的方法在鉴定不同黄牛群体多态性中的诊断应用。

7.权利要求6所述的应用，其特征在于用于中国黄牛肉用和生长性状的分子标记辅助选择中的应用。

8.一种检测中外不同牛群体的基因诊断试剂盒包括:

（1）特异引物，所述特性性引物包括

上游引物：5’-CAGGGGAAAAGGATGGG-3’；

下游引物：5’-CGAGGTAAGTGCACATGC-3’；

（2）生化试剂，所述生化试剂为

（3）操作说明书，所述操作说明书包括

PCR操作说明;

电泳检测与基因型判断；

待检个体的选择与淘汰；

注意事项。