[发明专利]抑制GCF基因表达的SiRNA及其载体和应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药基因工程领域。具体地涉及一种抑制GCF基因表达的SiRNA及其载体和应用。 

背景技术

RNA干扰（RNA interference,RNAi）是指内源性或外源性双链RNA（dsRNA）介导的细胞内mRNA发生特异性降解，从而导致靶基因的表达沉默，产生相应的功能表型的缺失现象。RNAi是一种从低等生物到哺乳动物都有的保守的防御机制。双链RNA在细胞内被Dicer酶切成约19-22nt的小片段干扰RNA（SiRNA）进而形成SiRNA-蛋白复合物（siRNP），SiRNA通过识别、降解具有同源序列的mRNA最终导致特异性的基因表达沉默（gene silencing）(Liu JY等,RNAi-gene silencing mediatedby dsRNAs,Section Genet Foreign Med Sci,2004,27(1):4-10)。因此，RNA干扰技术近年来日益受到人们的重视。SiRNA技术正在逐步应用在研究基因功能、细胞信号转导途径分析、冗余基因的确定、药物开发中靶标验证、基因治疗、病毒感染、癌症和显性遗传病治疗等。 

治疗肿瘤的方法主要有三种，分别为外科手术、化疗与放射治疗，其中放射治疗约占这些肿瘤治疗的27%左右。细胞的辐射效应与细胞的辐射敏感性和临床上肿瘤放射治疗有关。在临床上，辐射敏感性已成为提高肿瘤放疗效果的一个重要因素，这种辐射敏感性与辐射敏感基因有关。与辐射有关的早期反应基因IER5（Immediate Early Response5，简称为IER5，中文名称为早期反应基因5）的过表达能够抑制Hela细胞的分裂，而GCF（Homo sapiens chromosome2open reading frame3(C2orf3)基因为IER5的一个转录调控因子，GCF的结合位点在IER5启动子-388～-382bp和-274～-270bp，它在Genebank中编号为NM_003203.4，全长4455bp。 

目前有关GCF的研究主要有：GCF基因序列(Takimoto M,Mao P,Molecularanalysis of the GCF gene identifies revisions to the cDNA and amino acid sequences(1),Biochim Biophys Acta,1999,Oct6,1447(1):125-31)、基因和蛋白表达的情况，细胞分馏研究显示GCF主要存在于细胞核中，GCF是一个稳定的蛋白拥有相对比较长的半衰期，并且GCF是一个磷蛋白，它的磷酸化形式存在于细胞核内，磷酸化发生在丝 氨酸和苏氨酸残基上。GCF能够被冈田酸、佛波脂、周期AMP刺激，但是不能被钒刺激(Laura B,Hitoshi Y,Ira P and Alfred,Biochemical Characterization of Human GCF Transcription Factor in Tumor Cells,The Joural Biological Chemistry,1992,Vol.267,No.3,Issue of January25,pp.1689-1694)，此外它在某些病变组织上也有一些表达，比如GCF mRNA的高水平表达出现在KATO III和AGS(胃癌)、FEM-X（黑素瘤）、和U266B1(脊髓瘤)细胞中，克隆人类的一种成纤维细胞（W138）中没有发现GCFmRNA的表达，在鼠的一个细胞系（NIH3T3）和猴的一个细胞系（CV-1）中用交叉杂交也没有发现。原位杂交之后通过一个1.9kb GCF cDNA的基因探针分析人类染色体，结果显示GCF基因在2p11.1-11.2(Alfred C.Johnson,Ryoichiro Kageyamat,Nicholas C.Popescuy,and Ira Pastan,Expression and Chromosomal Localization of the Gene for the Human Transcriptional Repressor GCF,Department of Molecular and Cellular Biology,University of Arizona,Tucson,AZ85721,USA,Volume269,number2,288-291)。