[发明专利]一种合成多肽及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种合成多肽产品，具有以下氨基酸序列特征：H₂N-琥珀酰-L-丙氨酸-L-丙氨酸-L-苯丙氨酸-L-赖氨酸-L-脯氨酸-L-苯丙氨酸-OH。

2.根据权利要求1所述的多肽产品，是经过以下步骤制备而来：

（1）树脂上载

将取代度约0.5 mmol/g 的2-Cl-Trt 树脂4.36 g 置固相反应管中，以含5％ DIPEA 的DCM 溶液洗涤树脂3 次，将Fmoc-Phe-OH(4.127 g，5.2 mmol)溶于DCM(35 ml) 中， 加入DIPEA( 2.615 ml，15 mmol)，全部溶解后加入树脂中，室温摇摆反应1.5 h，抽干后用DCM(30 ml) 洗涤树脂3 次，加入DCM-MeOH-DIPEA(17∶2∶1) 混合液反应30 min 封闭未反应的树脂，抽干后用DCM(30 ml×2)、DMF(30 ml×2) 交替洗涤3 次，最后用无水乙醚洗涤2 次后抽干，红外干燥后得树脂9.592 g，用UV-Fmoc 方法测得上载后的取代度为0.59mmol/g，上载产率为97.9％；

（2）微波辅助脱除Fmoc 保护基

将树脂转移至100 ml 微波反应管中，加入含20％哌啶的DMF 溶液30 ml，氮气鼓泡，微波功率70 W，温度40 ℃，反应时间4min，之后抽除反应液，再加入含20％哌啶的DMF 溶液30 ml 以相同微波条件再反应1 次，抽除反应液后以DCM(30 ml×2)、DMF(30 ml×2) 交替洗涤3 次；

（3）微波辅助氨基酸缩合反应

Fmoc 保护氨基酸(10 mmol)、HATU(3.147g，10 mmol) 和HOOBt(1.391 g，10 mmol) 共同溶于DMF(30 ml) 中并加入DCM(5 ml)，冰水浴冷却至5 ℃，加入DIPEA(1.743 ml，10 mmol) 后混合均匀反应1 min，将该反应液加至脱除保护基后的树脂中，通氮气鼓泡混合，微波功率45 W，时间5 min，温度50 ℃，之后抽干反应液，以DCM(30 ml×2)、DMF(30 ml×2) 交替洗涤3 次，取少量树脂以Kaiser方法检测缩合情况，确认结果为阴性后脱除Fmoc 保护基；

（4）裂解树脂制备H₂N-琥珀酰-L-丙氨酸-L-丙氨酸-L-苯丙氨酸-L-赖氨酸-L-脯氨酸-L-苯丙氨酸-OH

将完成所有缩合循环后的树脂以DCM(30 ml×2)、DMF(30 ml×2) 交替洗涤2 次后转至100 ml 茄形瓶中，以无水乙醚(30 ml×3) 洗涤，以带有PP滤头的聚四氟乙烯(PTFE) 管抽干后置于红外灯下充分干燥；向树脂中加入TFA- 苯甲硫醚- 苯甲醚(90 ∶ 5 ∶ 5) (70 ml)，氩气保护下搅拌反应2 h，完毕后过滤，滤液缓慢滴至冰无水乙醚( 2 L) 中，产生沉淀，离心(2 500×g)3 min，弃去上清液，沉淀再用无水乙醚搅拌- 离心- 弃上清重复操作5次，合并沉淀，置真空干燥箱中于40 ℃避光干燥6h，得类白色固体(6.264 g，以树脂计粗产率为89.7％ )。