[发明专利]利用甘薯愈伤组织繁殖培养和保存植物寄生线虫的方法

权利要求书

1.一种利用甘薯愈伤组织繁殖培养和保存植物寄生线虫的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）甘薯愈伤组织的制备：将新鲜健康的甘薯洗净晾干，用酒精浸泡后，灼烧，至表皮变暗，削去表皮，切成甘薯片，放入灭菌培养皿中，封口，于22～28℃暗培养至长出甘薯愈伤组织；

（2）植物寄生线虫的消毒和接种：挑取或吸取植物寄生线虫，消毒，然后离心，去除上清，将沉淀的线虫用无菌水混匀继续离心，去除上清，最后将沉淀的线虫用无菌水稀释分散滴在甘薯愈伤组织上，封口；

（3）植物寄生线虫的繁殖培养：将步骤（2）中接种了植物寄生线虫的甘薯愈伤组织进行暗培养繁殖，培养温度为植物寄生线虫繁殖的适宜温度；

（4）植物寄生线虫的保存：将植物寄生线虫连同甘薯愈伤组织于4～20℃保存。

2.权利要求1所述的利用甘薯愈伤组织繁殖培养和保存植物寄生线虫的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的酒精为质量百分比70%的工业酒精；步骤（1）中所述的浸泡的时间为2min。

3.权利要求1所述的利用甘薯愈伤组织繁殖培养和保存植物寄生线虫的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的甘薯片厚度为4mm；步骤（1）中所述的培养皿的直径为6cm；步骤（1）中所述的封口可用封口膜或者保鲜膜进行封口；步骤（1）中所述的于22～28℃暗培养至长出甘薯愈伤组织的时间为10～15天。

4.权利要求1所述的利用甘薯愈伤组织繁殖培养和保存植物寄生线虫的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的植物寄生线虫为腐烂茎线虫（Ditylenchusdestructor）、起绒草茎线虫（D.dipsaci）或香蕉穿孔线虫（Radopholus similis）。

5.权利要求1所述的利用甘薯愈伤组织繁殖培养和保存植物寄生线虫的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的消毒为使用质量百分比0.2%的硫酸链霉素溶液处理3～12h。

6.权利要求1所述的利用甘薯愈伤组织繁殖培养和保存植物寄生线虫的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的离心的条件为4000rpm离心2min。

7.权利要求1所述的利用甘薯愈伤组织繁殖培养和保存植物寄生线虫的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的培养温度具体如下：当所述的植物寄生线虫为腐烂茎线虫时，所述的培养温度为20～25℃；当所述的植物寄生线虫为起绒草茎线虫时，所述的培养温度为17～20℃；当所述的植物寄生线虫为香蕉穿孔线虫时，所述的培养温度为25～30℃。

8.权利要求1所述的利用甘薯愈伤组织繁殖培养和保存植物寄生线虫的方法，其特征在于：步骤（4）中所述的植物寄生线虫为在甘薯愈伤组织上培养50天的植物寄生线虫。

9.权利要求1所述的利用甘薯愈伤组织繁殖培养和保存植物寄生线虫的方法，其特征在于：步骤（4）中所述的保存的温度如下：所述的植物寄生线虫为腐烂茎线虫或起绒草茎线虫时，所述的保存的温度为4℃；所述的植物寄生线虫为香蕉穿孔线虫时，所述的保存的温度为20℃。

10.权利要求1～9任一项所述的利用甘薯愈伤组织繁殖培养和保存植物寄生线虫的方法，其特征在于：包括线虫继代培养的步骤，具体为在接种扩增繁殖线虫的甘薯愈伤组织培养皿中加入无菌水，然后挑出或吸取线虫，重复权利要求1的步骤（2）和（3）即可达到继代培养之目的。