[发明专利]文蛤DNA结合抑制因子mmID2基因及其编码蛋白和应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体的说是一种文蛤DNA结合抑制因子mmID2基因及其编码蛋白和应用。

背景技术

DNA结合抑制因子是一类在生物发育过程中广泛表达的转录调控因子,属于螺旋-环-螺旋(helix-loop-helix,HLH)转录因子家族成员之一，对碱性HLH(bHLH)转录因子活性起负调节作用。bHLH转录因子是一群广泛分布或具有组织特异性的，以同二聚体或异二聚体形式和DNA结合的蛋白质组成的一个大家族，能活化与细胞分化有关的基因转录。但作为HLH家族成员的ID分子，由于缺乏DNA结合域，与一些转录因子(主要是bHLH蛋白)形成非活性异二聚体，可抑制bHLH与DNA上的E基序结合或与其他组织特异性bHLH转录因子结合，从而负向调控细胞分化。自1990年在哺乳类动物中发现ID分子以来，有关该分子在哺乳细胞增殖、分化、肿瘤发生等方面进行了广泛而深入的研究。然而关于ID基因在无脊椎动物中的研究还鲜有报道。到目前为止，没有从文蛤中获得ID基因的报道。

贝类组织培养工作从20世纪60年代末期开始,国内从20世纪80年代才开始进行该领域的研究。但是就目前的情况看,贝类的组织培养还未取得突破性的进展,至今还未有成功建立贝类细胞系的报道。培养基中合适的生长添加因子的缺乏，无法为细胞提供一个类似生物体内的生长环境，无疑是影响贝类细胞系成功建立的关键因素之一。

发明内容

本发明的目的是提供一种文蛤DNA结合抑制因子mmID2基因及其编码蛋白和应用。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

一种文蛤DNA结合抑制因子mmID2基因，文蛤mmID2基因的cDNA序列为序列表SEQ ID No.1中所示的核苷酸序列所示。

文蛤DNA结合抑制因子mmID2基因的编码蛋白，所述文蛤DNA结合抑制因子mmID2基因的cDNA序列所编码的蛋白为序列表SEQ ID NO 2中所示的氨基酸序列。

文蛤DNA结合抑制因子mmID2基因的应用，所述序列表SEQ ID No.1中所示的文蛤mmID2基因的重组表达产物可作为细胞增殖的生长添加因子。

文蛤DNA结合抑制因子mmID2基因的应用，所述序列表SEQ ID No.1中所示的文蛤mmID2基因的重组表达产物可作为细胞分化抑制剂。

本发明所具有的优点：本发明利用表达序列标签技术（EST）,从文蛤中克隆到mmID2基因cDNA全长序列，通过PCR技术扩增编码mmID2蛋白的基因片段并将其克隆到pET30a(+)表达载体中，在大肠杆菌BL21(DE3)-plysS实现体外重组表达。重组蛋白经HisTrap HP亲和柱纯化后得到具有活性的纯化蛋白。经检测此重组蛋白具有明显的促进细胞增殖，抑制细胞分化的作用，可以应用于细胞培养作为促进细胞增殖蛋白使用；将本发明文蛤mmID2重组蛋白具作为促进贝类细胞增殖的生长因子添加到培养基中，可以为贝类等无脊椎动物细胞培养研究带来新的契机。并且该重组蛋白具有规模化生产的可能，可以弥补天然蛋白量低以致难以满足需要的局限。

附图说明

图1为本发明实施例提供的纯化的文蛤mmID2重组蛋白，其中从左到右分别为M蛋白marker，1为纯化的重组蛋白）。

图2为本发明实施例提供的所获得文蛤mmID2重组蛋白抑制分化，促进C2C12细胞增殖效果图。

图3为本发明实施例提供的空白对照组C2C12细胞形态改变发生分化效果图。

具体实施方式

下面的实施例中将本发明作进一步阐述，但本发明不限于此。

实施例1.

一种克隆得到的文蛤DNA结合抑制因子mmID2基因，具有SEQ ID NO.1所示的碱基序列。

本发明中的文蛤DNA结合抑制因子mmID2基因的cDNA序列克隆包括下列步骤：

a)文蛤总RNA的提取及mRNA的纯化；

b)文蛤cDNA文库构建；

c)文蛤cDNA文库EST序列的大规模测定；

d)文蛤EST序列的同源性分析及mmID2基因片段的筛选；

e)RACE扩增获得的mmID2全序列以及全序列的验证。

序列表SEQ ID No.1为：