[发明专利]吸附剂、固相载体及精制方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于血液凝固因子(blood coagulation factor)或细胞粘附因子(cell adhesion factor)的吸附剂及精制方法。

背景技术

作为蛋白质(protein)等生物分子的精制方法，一般已知有色谱法(Chromatography)，作为其具体例，有阳离子交换色谱法(Cation ExchangeChromatography)、阴离子交换色谱法(Anion Exchange Chromatography)、凝胶过滤色谱法(Gel filtration Chromatography)、疏水性作用色谱法(Hydrophobic Interaction Chromatography)、亲和色谱法(AffinityChromatography)。由于通过组合这些方法可高度地精制对象蛋白质，所以在对血液、血浆或细胞等的培养液中含有的例如成为生物医药品的红细胞生成素或免疫球蛋白等的精制中，色谱法逐渐成为重要技术。尤其是亲和色谱法重要的是如下方面：与其他方法相比，对于对象物质的选择性非常高，因此可通过1次操作高度地精制，而可凭借短操作时间获得高生产性。

亲和色谱法是利用与对象物质具有相互作用的配位基(ligand)来进行，有时进行使用蛋白质作为该配位基的精制。例如，已知有利用蛋白质A固定化填充剂来精制免疫球蛋白(Immunoglobulin)而制造抗体医药，或者利用明胶(Gelatin)固定化填充剂来精制纤维连接蛋白(Fibronectin)等血液成分等。

虽然以蛋白质作为配位基的亲和色谱法能够实现高选择性的效率良好的精制，但存在由如下原因引起配位基劣化的问题：由碱洗引起的配位基的改性或分解、由蛋白质分解酶引起的配位基的分解、或配位基本身的脆弱性。

另外，以蛋白质作为配位基的亲和色谱法存在其配位基材料中会混入来自动物的材料的情况，也存在安全性问题。即，近年来，基于对疯牛病等人畜共通传染病的担忧，例如需要避免使用来自牛的明胶作为配位基，谋求一种代替来自动物材料的配位基材料。

此外，以蛋白质作为配位基的亲和色谱法存在如下情况：由于配位基与对象物质的高亲和性，所以对象物质的回收条件必须采用温和条件。例如，在自所述的蛋白质A固定化凝胶中洗脱出免疫球蛋白的情况下，需要酸性条件(例如pH值为3)，在自明胶固定化凝胶中洗脱出纤维连接蛋白的情况下，有时使用8M的尿素、1M的溴化钠(NaBr)或精氨酸(Arginine)等(非专利文献1)。在此种严格的洗脱条件的基础上，对象物质的蛋白质改性的担忧、或洗脱所使用的尿素或精氨酸等试剂为高浓度而耗费成本成为问题，或者洗脱步骤后需要进行中和等处理而使成本或繁杂度成为问题。

如此，在蛋白质的精制中，业界寻求一种具有与对象物质的高亲和性与难劣化性，同时可在温和条件下利用简便的程序，且廉价、安全地精制蛋白质的亲和配位基。

此处，作为生物分子而熟知的胶原蛋白(Collagen)是具有在相同方向上聚合3条包含Gly-X-Y(X、Y为各种氨基酸，X为Pro、Y为Hyp的情形居多)的重复结构的多肽(Poly peptide)所形成的三重螺旋结构的蛋白质的统称。

已知有天然胶原蛋白会与各种生物分子结合，或具有血小板聚集能力。目前为止，得知对于天然胶原蛋白中的特定氨基酸序列而言会结合特定的蛋白质等分子(非专利文献3)。利用此种知识见解，也对创造出一种与特定的对象分子结合的胶原蛋白样肽进行研究，例如揭示了与血管性血友病因子(von Willebrand Factor)等胶原蛋白结合分子结合的具有特定氨基酸序列的胶原蛋白样肽(非专利文献2)。

另外，作为以胶原蛋白样肽的形式创造出的肽，存在具有Pro-X-Gly(X为Pro或Hyp)序列的重复结构的多肽。得知该多肽具有血小板聚集能力(非专利文献4)，并揭示有一种含有该多肽的血小板聚集引发物质(专利文献1)。然而，尚未知晓具有所述序列的重复结构的多肽片段是以高亲和性与纤维连接蛋白或血管性血友病因子等进行结合。

[现有技术文献]

[专利文献]

专利文献1：国际公开第2008/075589号公报

[非专利文献]

非专利文献1：亲和色谱原理和方法(通用电气医疗说明书)第69页(Affinity Chromatography Principles and Methods(Handbook from GEHealthcare)p.69)