[发明专利]一种从千日红中提取分离酪氨酸酶抑制剂的方法

权利要求书

1.一种从千日红中提取分离酪氨酸酶抑制剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：

将干燥的千日红和提取溶剂按固液比1:20~1:100(g/mL)混合，在20~80℃下提取0.5~4h，提取搅拌速度为100~250r/min，提取后经过滤分离，滤过液在40~60℃下减压浓缩干燥，得到含有酪氨酸酶抑制组分千日红粗提取物。

2.根据权利要求1所述的从千日红中提取分离酪氨酸酶抑制剂的方法，其特征在于，还包括以下步骤：

将千日红粗提取物用水混悬至密度为1.1~1.2g/cm³，在20~40℃下用有机溶剂进行萃取，所获得的萃取部位在35~55℃下减压浓缩干燥，得到含有酪氨酸酶抑制组分千日红粗提取物的萃取部位。

3.根据权利要求2所述的从千日红中提取分离酪氨酸酶抑制剂的方法，其特征在于，还包括以下步骤：

（1）柱层析一次分离：对千日红粗提取物的萃取部位进行硅胶柱层析，用石油醚和乙酸乙酯以体积比从9：1至4：6进行混合梯度洗脱，流动相流速为20-30mL/min，分部收集酪氨酸酶抑制活性超过50%的组分；

（2）柱层析二次分离：将经柱层析一次分离后收集的组分进行羟丙基葡聚糖凝胶柱层析，采用水、甲醇或甲醇-氯仿进行洗脱，流动相流速为0.5-1.5mL/min，分部收集酪氨酸酶抑制活性超过50%的组分或具有酪氨酸酶抑制活性的单体化合物组分；其中甲醇-氯仿中甲醇与氯仿的体积比为1：0.95~1：1.05；

（3）柱层析三次分离：将经柱层析二次分离后收集的组分采用羟丙基葡聚糖凝胶柱层析进一步纯化，采用甲醇-水或甲醇-氯仿进行洗脱，流动相流速为0.5~1.5mL/min，分部收集酪氨酸酶抑制活性超过50%的组分或具有酪氨酸酶抑制活性的单体化合物组分；其中甲醇-水中甲醇与水的体积比为1：0.95~1：1.05，甲醇-氯仿中甲醇与氯仿体积比为1：0.95~1：1.05；

（4）柱层析纯化：将经柱层析三次分离后收集的非单一化合物组分采用十八烷基硅烷键合硅胶柱层析进行纯化，采用甲醇水溶液从甲醇浓度100%(v/v)至10%(v/v)进行梯度洗脱，流动相流速为0.5~1.5mL/min，收集具有酪氨酸酶抑制活性的单体化合物组分。

4.根据权利要求1所述的从千日红中提取分离酪氨酸酶抑制剂的方法，其特征在于，所述提取溶剂为水、45-55%(v/v)的甲醇水溶液、20~80%(v/v)的乙醇水溶液、甲醇或乙醇。

5.根据权利要求2所述的从千日红中提取分离酪氨酸酶抑制剂的方法，其特征在于，所述有机溶剂为石油醚、乙酸乙酯或正丁醇。

6.根据权利要求3所述的从千日红中提取分离酪氨酸酶抑制剂的方法，其特征在于，所述具有酪氨酸酶抑制活性的单体化合物组分为香草酸、麦黄酮、对羟基肉桂酸或对甲氧基肉桂酸。