[发明专利]MC1R基因突变检测特异性引物和液相芯片

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种MC1R基因突变检测特异性引物和液相芯片。

背景技术

黑素皮质素1型受体（melanocortin 1receptor，MC1R）位于16号染色体16q24.3长臂上，具体位于16号染色体89984286到89987384碱基对之间。MC1R是黑素皮质素受体（melanocortin receptor，MCR）家族中最小的一个(297～317个氨基酸)，该家族都是G蛋白耦合受体，有7个跨膜功能域，其天然配体为黑素皮质素激素肽。现已明确黑素皮质素系统（MC）广泛参与了多种生理通路的调控，包括色素沉着、摄食行为、体重和能量代谢平衡、抗感染、性功能和疼痛等功能。MC1R主要在黑色素细胞中表达，MC1R基因变异能增加黑肤色个体罹患肿瘤的风险，另外MC1R基因还是一个主要的雀斑基因。

目前，MC1R基因突变检测方法主要有：Illumina光纤微珠芯片技术、基质辅助激光解析电离时间飞行质谱技术（MALDI-TOF-MS）和荧光定量PCR技术，虽然Illumina光纤微珠芯片技术是高灵敏度和精确性的高通量检测系统，但是自动化程度低，手工操作比较多，难以满足实际应用的需要。基质辅助激光解析电离时间飞行质谱技术是一种软电离技术，在蛋白质等生物大分子的检测中有着强大而成熟的功能，但是在核酸检测领域，由于核酸分子本身的特殊性，检测受到一定的限制。荧光定量PCR技术具有灵敏度高、特异性强、自动化程度高的特点，但也存在样品易污染、假阳性率高的缺点，且每次只能检测一种突变类型。

发明内容

本发明的目的之一是提供MC1R基因突变检测液相芯片，该液相芯片可用于单独或并行检测MC1R基因三种常见基因型C451T、C478T和G565T的野生型和突变型。

实现上述目的的技术方案如下。

一种MC1R基因突变检测液相芯片，包括有：

（A）.针对MC1R基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对：每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为：针对C451T位点的SEQ ID NO.7及SEQ ID NO.8，针对C478T位点的SEQ ID NO.9及SEQ ID NO.10，和/或针对G565T位点的SEQ ID NO.11及SEQ ID NO.12；所述tag序列选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6；

（B）.有不同anti-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球，所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti-tag序列选自SEQ ID NO.13～SEQ ID NO.18，且所述anti-tag序列能相应地与（A）中所选的tag序列互补配对；

（C）.用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。

在其中一个实施例中，所述扩增引物为：针对C451T、C478T位点的SEQ ID NO.19及SEQID NO.20，和/或针对G565T位点的SEQ ID NO.21及SEQ ID NO.22。

在其中一个实施例中，所述ASPE引物为：针对C451T位点的由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.7组成的序列及由SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.8组成的序列，针对C478T位点的由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.9组成的序列及由SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.10组成的序列，和/或针对G565T位点的由SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.11组成的序列及由SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.12组成的序列。

本发明的另一目的是提供用于MC1R基因突变检测的特异性引物。

实现上述目的技术方案如下。

用于MC1R基因突变检测的特异性引物，所述特异性引物序列为：针对C451T位点的SEQID NO.7及SEQ ID NO.8，针对C478T位点的SEQ ID NO.9及SEQ ID NO.10，和/或针对G565T位点的SEQ ID NO.11及SEQ ID NO.12。

本发明的主要优点在于：