[发明专利]一种采用生物提取法制备缩宫素溶液的生产工艺

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种采用生物提取法制备缩宫素溶液的生产工艺。

背景技术

缩宫素（Oxytocin），又称催产素，是一种由9个氨基酸残基组成的、具有一个二硫键的、具有生物活性的多肽类产品，分子式C₄₃H₆₆N₁₂O₁₂S₂，分子量1007.2，等电点7.7，易溶于水，溶于丙酮、丁醇和稀醋酸，不溶于乙醚和石油醚，干品稳定，pH3.5～4.4的酸性溶液中稳定，碱性溶液中不稳定。结构式如下：

缩宫素多肽的N末端和C末端分别为半胱氨酸和甘氨酸，其间的七个氨基酸以肽键相连形成一级结构，在此基础上，由于氢键的形成，作用九肽间产生二级螺旋结构；而N末端的半胱氨酸和第6位的半胱氨酸的S结合形成双S键而形成一个内环，加之疏水基团，如9肽中的酪氨酸，亮氨酸和异亮氨酸等形成疏水键，使九肽中的极性基团在内部，而离子基团在外部，使产品内部排斥水相而形成紧密结构的趋势-β折叠，形成生物活性特定的空间结构：活性中心。而缩宫素具有天然的双S键和β-回折的结构决定了缩宫素的生物活性。

缩宫素是一种哺乳动物激素，于1895年被发现，主要由下丘脑视上核和室旁核的神经分泌大细胞系统分泌产生，从垂体后叶释放入血液，沿血液循环到达远端的器官发挥作用，在临床上被广泛用于引产、催产及预防因分娩后子宫乏力引起的大出血，是目前美国FDA唯一认可用于临床引产的药物。缩宫素还能刺激乳腺的平滑肌收缩，有助于乳汁自乳房排出，但并不增加乳腺的乳汁分泌量。

缩宫素不仅可作为育龄妇女生育时催产使用，同时该产品在国际上也被广泛应用于动、植物养殖方面，如用于动物，不仅可提高动物的受胎率及繁殖率，还可提高单位产奶量；用于果树，则不仅可加强果物的优异外观，还能起到催熟的作用。

目前主要采用化学合成法制备缩宫素。我国自1969年第一次合成缩宫素以来，国内30余家缩宫素制剂生产厂家均采用九肽酰胺经钠-液氨法消除、缩合的办法合成缩宫素。然而合成的缩宫素粗品含有一些与缩宫素结构类似的杂肽，例如氨基酸消旋化产生的非对映异构体、部分氨基酸未连接上产生的缺失肽、肽键断裂产生的断裂肽以及氧化不彻底产生的还原态开环肽等，造成缩宫素产品收率较低，纯化困难。而且采用化学合成法制备的缩宫素无法形成其天然的双S键和β-回折的结构，产品存在生物活性低的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于针对现有制备方法的缺陷提供一种采用生物提取法制备缩宫素溶液的生产工艺。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种采用生物提取法制备缩宫素溶液的生产工艺，包括

步骤1：垂体后叶干粉加水提取，离心收集提取液；

步骤2：提取液经含有0.25%冰醋酸水溶液（体积/体积）的层析柱分离收集层析液，其中所述层析柱的填料为人造沸石；

步骤3：层析液用冰醋酸调节pH至3.5，加热至100℃保温3分钟，立即冷却后过滤收集滤液，滤液用冰醋酸调节pH至3.5，加入皂土吸附，过滤收集滤液即得。

本发明所述生产工艺运用独特的生物制备工艺技术，采用水提取垂体后叶干粉中的缩宫素，然后利用人造沸石吸附除去垂体后叶干粉提取液中加压素最后利用皂土除去小分子物质、有机有色物和热原，从而使制得缩宫素具有天然的双S键和β-回折的结构，提高了制得的缩宫素的溶液的生物活性。

其中，本发明所述垂体后叶干粉可以通过商业渠道从市场上购买得到，也可由哺乳动物小脑垂体后叶自行制备得到。在一个实施例中，所述垂体后叶干粉的制备方法为取哺乳动物小脑置于丙酮中脱水后，分离垂体后叶，干燥后粉碎过40-60目筛得到。其中，所述哺乳动物为猪、狗、牛、羊、马中的一种。优选为猪、羊。

本发明所述生产工艺首先采用水提取垂体后叶干粉以将其中的缩宫素分离。其中，步骤1所述加水提取优选为加水提取四次，每次30分钟，合并提取液。

进一步的，作为优选，步骤1所述加水提取的步骤中垂体后叶干粉与水的重量比为1:10-1:20。更优选为1:12-1:16。

在本发明中，所述提取缩宫素的水可以为蒸馏水、去离子水、注射用水中的一种。优选为注射用水。

在一个具体实施例中所述加水提取为称后叶干粉，加入16倍注射用水，搅拌提取30分钟，离心，收集液体，残渣再分别加入14倍、12倍、12倍注射用水按同法提取三次，合并四次离心液。