[发明专利]一种时间分辨荧光法综合检测乳腺癌试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物和医学检测技术领域，具体涉及一种在同一反应体系内同时综合检测乳腺癌肿瘤标志物指标CA125、CEA、CA153的时间分辨荧光免疫检测试剂盒，同时还涉及该试剂盒在综合检测乳腺癌肿瘤标志物CA125、CEA、CA153中的应用。

背景技术

乳腺癌发病年龄分布在东西方国家有所不同，在高发区如北欧、北美等国家，乳腺癌从20岁左右开始出现，在绝经期即45-50岁之前保持快速上升势头，大约年龄每增长10-20岁发病率上升1倍，绝经期后上升相对缓慢，75-85岁达到最高。而在亚洲等低发地区，乳腺癌的发病率在绝经后会略下降，一般乳腺癌的发病高峰在45-55岁之间，亚洲人移居西方国家后仍保持这种年龄分布特征。早期发现、确诊乳腺癌，实施手术切除，依然是目前该疾病最有效的治疗方法。因此，在早期、更加准确的确诊乳腺癌依然是治疗该疾病的关键。

目前，诊断乳腺癌的常用检测指标有CA125、CEA、CA153等几种。在实际诊断乳腺癌时，一般是用CA125、CEA、CA153三种指标综合确诊乳腺癌，因为三项指标综合分析在特异性和敏感度上明显高于单一指标。目前常规实验室或医疗单位用于检测该三项指标通常分别采用单一试剂盒，即一个试剂盒针对一种肿瘤标记物进行检测，此种方式存在的缺点是：1、检测步骤繁多，费时费力；2、几种标记物分别采用几种单指标试剂盒检测，由于不同生产厂家的试剂盒存在差异，且同一厂家的不同试剂盒由于检测的标记物不同可能会存在控制条件、参数的差异而导致检测结果存在误差，此种误差在综合分析三种标记物的特异性和敏感性上会产生较大的影响，可能导致判断结果相差甚远。因此，开发一种能够在相对同一的检测条件下同时能够检测该三种肿瘤标记物的试剂盒，就能降低由于人为原因造成的检测误差，大大提高综合分析检测结果的特异性和敏感性，为下一步的研究或判断做出准确的结论提供更充分的依据。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的问题，提供一种在同一反应体系内同时综合检测乳腺癌肿瘤标志物指标CA125、CEA、CA153的时间分辨荧光免疫检测试剂盒。

本发明的目的还在于提供一种该试剂盒的应用。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：一种时间分辨荧光法综合检测乳腺癌试剂盒，把三种乳腺癌肿瘤标志物CA125、CEA、CA153综合在同一微孔的同一反应体系内，采用时间分辨荧光免疫法检测，该试剂盒包括：分别抗CA125、CEA、CA153第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板；用Eu³⁺标记的抗CA125、Tb³⁺标记的抗CEA、Sm³⁺标记的抗CA153第二株单克隆抗体混合抗体；分析缓冲液；共用荧光增强剂；洗涤液；质控品。

所述的第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板的制备方法为：把分别抗CA125、CEA、CA153第一株单克隆抗体混合抗体用包被缓冲液稀释，制得抗体包被液，然后向微孔板的每个孔中分别加入100μl的所述抗体包被液，于37℃包被2小时，然后用生理盐水冲洗微孔板三次，然后再向微孔板的每个孔中分别加入200μl的封板液，于室温封闭2小时，然后用生理盐水冲洗微孔板两次，冷冻干燥，制得第一株单克隆抗体混合抗体包被的微孔板。

其中，所述抗体包被液中，分别抗CA125、CEA、CA153的第一株单克隆抗体的浓度均为0.009～0.014g/L。

所述用Eu³⁺标记的抗CA125、Tb³⁺标记的抗CEA、Sm³⁺标记的抗CA153第二株单克隆抗体混合抗体中，用Eu³⁺标记的抗CA125抗体、Tb³⁺标记的抗CEA抗体、Sm³⁺标记的抗CA153抗体的质量配比为：Eu³⁺标记的抗CA125抗体:Tb³⁺标记的抗CEA抗体:Sm³⁺标记的抗CA153抗体=（7～13）:（6～11）:（6.5～13）。

分析缓冲液的制备方法为：向每升浓度为0.05mol/L、pH值为8.0的Tris-Hcl缓冲液中加入9g NaCl、0.5g NaN₃、10g BSA、0.1ml吐温-40、5g聚乙二醇，混合均匀，即制得分析缓冲液。