[发明专利]BARD1基因突变检测特异性引物和液相芯片

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种BARD1基因突变检测特异性引物和液相芯片。

背景技术

BRCA1关联环域1（BRCA1 associated RING domain，BARD1）是一种可以与BRCA1蛋白结合的蛋白，因为具有和BRCA1相似的环指功能域，所以命名为BARD1。BARD1基因位于2号染色体2q34-35的长臂上，编码含777个氨基酸残基的蛋白。该蛋白的主要功能域有环指功能域、三个锚蛋白重复序列和两个羧基端功能域。BARD1基因突变可以阻止BARD1蛋白对受损DNA的修复，DNA缺陷的累积会使细胞的生长分裂失去控制，从而形成肿瘤。另外，有研究发现BARD1基因在乳腺癌的发生发展中发挥了一定的作用。

目前，BARD1基因突变检测方法主要有：基质辅助激光解析电离时间飞行质谱技术（MALDI-TOF-MS）、荧光定量PCR技术和PCR-RFLP，基质辅助激光解析电离时间飞行质谱技术是一种软电离技术，在蛋白质等生物大分子的检测中有着强大而成熟的功能，但是在核酸检测领域，由于核酸分子本身的特殊性，检测受到一定的限制，荧光定量PCR技术具有灵敏度高、特异性强、自动化程度高的特点，但也存在样品易污染、假阳性率高的缺点，且每次只能检测一种突变类型，PCR-RFLP法是基于基因突变造成的限制性内切酶识别位点的改变，如位点丢失或产生新位点，通过PCR扩增某一特定片段，再用限制性内切酶酶切扩增产物，电泳观察片段的大小，这种方法用于检测酶切位点改变的基因突变，可直接判断基因型，但该法不能用于没有产生新酶切位点的基因突变检测。

发明内容

本发明的目的之一是提供BARD1基因突变检测液相芯片，该液相芯片可用于单独或并行检测BARD1基因五种常见基因型T6883G、A43635G、G1670C、G25542A和G1134C的野生型和突变型。

实现上述目的的技术方案如下。

一种BARD1基因突变检测液相芯片，包括有：

（A）.针对BARD1基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对：每条ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为：针对T6883G位点的SEQ ID NO.11及SEQ ID NO.12，针对A43635G位点的SEQ IDNO.13及SEQ ID NO.14，针对G1670C位点的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16，针对G25542A位点的SEQ ID NO.17及SEQ ID NO.18，和/或针对G1134C位点的SEQ ID NO.19及SEQ ID NO.20；所述tag序列选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.10；

（B）.有不同anti-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球，所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti-tag序列选自SEQ ID NO.21～SEQ ID NO.30，且所述anti-tag序列能相应地与（A）中所选的tag序列互补配对；

（C）.用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。

在其中一个实施例中，所述扩增引物为：针对T6883G位点的SEQ ID NO.31及SEQ ID NO.32，针对A43635G位点的SEQ ID NO.33及SEQ ID NO.34，针对G1670C位点的SEQ ID NO.35及SEQ IDNO.36，针对G25542A位点的SEQ ID NO.37及SEQ ID NO.38，和/或针对G1134C位点的SEQ IDNO.39及SEQ ID NO.40。