[发明专利]鸡传染性法氏囊病VP2基因及其应用

说明书

技术领域

本发明属于禽类抗原筛选技术领域，具体涉及一种鸡传染性法氏囊病VP2基因及其应用。

背景技术

鸡传染性法氏囊病（Infectious Bursal Disease，IBD）又称鸡传染性腔上囊病，是由传染性法氏囊病毒引起的一种急性、接触传染性疾病。以法氏囊发炎、坏死、萎缩和法氏囊内淋巴细胞严重受损为特征，能够引起鸡的免疫机能障碍，干扰各种疫苗的免疫效果。该病发病率高，是目前养禽业最重要的疾病之一。

接种疫苗是一种有效的预防传染性法氏囊病的措施，目前普遍使用的弱毒苗和灭活苗虽然对IBD的预防起了相当大的作用，但由于近年来鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）变异株和超强毒株的出现，经常导致免疫失败，传统的灭活疫苗和弱毒疫苗已经面临着严峻的考验，基因工程亚单位疫苗的出现为鸡传染性法氏囊病预防提供了一条新的途径。

基因工程亚单位疫苗又称重组亚单位疫苗或生物合成亚单位疫苗，是利用DNA重组技术，将编码病原微生物保护性抗原的基因导入受体菌（如大肠杆菌）或细胞，使其在受体中高效表达，分泌保护性抗原肽链。提取保护性抗原肽链，加入佐剂即制成基因工程亚单位疫苗。但制备基因工程亚单位疫苗的关键是筛选出新的，具有更好免疫原性的抗原基因。

发明内容

本发明的目的是提供一种鸡传染性法氏囊病毒（IBDV）的主要宿主保护性抗原VP2基因，即一种具有了IBD超强毒的VP2基因，并将该基因重组表达后制成亚单位疫苗，从而有效弥补现有鸡传染性法氏囊病疫苗对IBDV变异株免疫不高的缺陷。

本发明筛选出的鸡传染性法氏囊病VP2基因，其氨基酸序列为SEQ ID NO:1。

上述鸡传染性法氏囊病VP2基因的核苷酸序列为SEQ ID NO:2。

本发明筛选出的鸡传染性法氏囊病VP2基因用作基因工程亚单位疫苗。

本发明筛选出的鸡传染性法氏囊病VP2基因制备的亚单位疫苗免疫21日龄SPF鸡，21日后能产生坚强免疫力，使免疫鸡抵抗鸡传染性法氏囊病病毒强毒的攻击。

具体实施方式

IBDV的主要结构蛋白VP2蛋白是最主要宿主保护性抗原，本发明是用PCR方法扩增了IBD超强毒的VP2基因，克隆到pET-28a载体上，转化BL21(DE3)，经IPTG诱导后VP2蛋白获得了表达，将表达菌体高压匀浆破碎后离心取上清即为VP2蛋白溶液，加入矿物油佐剂制成油乳剂疫苗，可用于预防鸡传染性法氏囊病。

下面结合具体的实施例对本发明的鸡传染性法氏囊病毒VP2基因进行详细的描述。

一、VP2基因的筛选

用Primer5.0软件设计了一对扩增鸡传染性法氏囊病病毒VP2全基因引物，并在上游引物5′端加入保护性碱基及BamH I酶切位点，在下游引物的5′端加入保护性碱基和Xho I酶切位点，引物序列为：

Primer 1：5′-GCG TCG ACA TGA CAA ACC TGC AAG ATC - 3′

Primer 2：5′-CCC TCG AGT TAT CCT TAT GGC CCG GAT T -3′