[发明专利]维生素C对效应记忆性T细胞的数量在体外扩增上的应用

说明书

技术领域

本发明涉及维生素C对效应记忆性T细胞的数量在体外扩增上的应用。

背景技术

维生素C（Vc）是一种小分子药物，最早在临床上用于坏血病的治疗，其抗氧化作用被广泛的应用，近年来的研究发现，Vc在抑制肿瘤生长上发挥了一定的作用，并且可以高效的维持干细胞的存活和自我更新。

HIV-1 感染导致的艾滋病（Acquired Immune Deficiency Syndrome，AIDS）是本世纪威胁人类健康的重大传染病。目前，国际上多采用高效抗逆转录病毒（highly active antiretroviral therapy，HAART)治疗艾滋病。HAART可在短期内将病毒载量控制在较低的水平，改善艾滋病患者的生存质量，但不能完全清除体内病毒，需终身服药，且HAART费用昂贵、有严重的副作用、易耐药。随着我国HIV-1感染人数的日益增加，亟待研发新的行之有效的抗病毒治疗方法。随着研究的不断深入，发现特异性T淋巴细胞对于艾滋病患者的病毒清除和免疫重建中疗效显著。T细胞的体外扩增一直是免疫过继治疗的一大热点。

在HIV-1病毒感染过程中，记忆性T细胞介导的免疫反应在清除HIV-1病毒方面发挥了关键性作用。并且效应记忆性T细胞（TEM）在病毒控制上效果更为显著。由于TEM细胞在T细胞的总数中占的比例非常小，用传统的体外扩增方法难以获得。目前一些研究者使用人工抗原来提成细胞，在体外提高T细胞的增殖并用于过继治疗，但是此技术成本高并且尚未保证临床治疗的安全性。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供Vc对效应记忆性T细胞的数量在体外扩增上的应用。

本发明涉及Vc（Vc）对效应记忆性T细胞的数量在体外扩增上的应用。

本发明所述效应记忆性T细胞为CD4⁺T细胞。

本发明还提供了Vc体外扩增T细胞的最适剂量为50μg/ml ~125μg/ml，更优选为100μg/ml。

本发明采用小分子药物Vc对CD4⁺T效应记忆性T细胞进行了有效的体外扩增，并且找出了其促进体外扩增的最适浓度，该方法具有安全性高、成本低廉等优点，为过继免疫治疗的广泛开展提供了良好的技术支持。

附图说明

图1a为不同浓度的Vc对CD4⁺T细胞的扩增效果。

图1b为流式方法检测Vc对CD4⁺T细胞的扩增效果。

图2a为流式方法圈定待检测的CD45RA^-细胞。

图2b为流式方法检测CD4⁺TEM细胞。

图2c为不同浓度Vc处理后CD4⁺TEM细胞比例的检测。

图3 为Vc处理后不同时间点的两组CD4⁺TEM细胞数量的比较。

具体实施方式

为了更好地理解本发明的实质，下面结合试验和结果来说明Vc对效应记忆性T细胞的数量在体外扩增上的应用。

、试验材料

人的外周成分血由广州市血液中心提供，试验中随机选取了20份正常人的血液样本。

主要试剂： RPMI1640培养基购自于INVERTROGEN公司；胎牛血清购自于GIBCO公司；EDTA、BSA购于上海生工生物有限公司；Vc购自于SIGMA公司；淋巴细胞分离液购自于天津灏阳生物制品有限责任公司；流式细胞仪检测抗体anti-CD4-PE、anti-CD27-FITC、anti-CCR7-PECY5、CFSE购自于BD公司；anti-CD45RA-ECD购自于BECKMAN公司； CD4⁺T细胞阴性选择磁珠购自于BD公司。

主要的实验仪器：倒置生物显微镜（Leica）、CO₂细胞培养箱（Thermo SCIENTIFIC）、台式高速离心机（Eppendorf Centrifuge 5810R）、生物安全柜（Thermo SCIENTIFIC）、流式细胞仪（Beckman Coulter公司）、磁珠分选磁力架（BD Pharmigen）。

、细胞培养

2.1细胞提取分离