[发明专利]同型半胱氨酸检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及同型半胱氨酸检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

同型半胱氨酸（HCY）是一种含硫氨基酸，是蛋氨酸的中间代谢产物，在体内由甲硫氨酸转甲基后生成。在血浆中，HCY有3种形式：HCY、HCY二硫化物和HCY——半胱氨酸。在正常人体内游离型HCY很少，约有80%与清蛋白以二硫键结合，仅小部分呈游离状态，所有统称为总HCY。红细胞是产生HCY的主要场所，血液离体后在收缩和凝固的这段时间，红细胞仍不断产生HCY并释放到细胞外液：一般认为测定血浆标本为好。关于血浆HCY正常范围的确定目前比较公认的参考范围是5～15μmol/L。

所谓HCY血症是指血浆中游离的及与蛋白结合的HCY和混合性二硫化物包括HCY和HCY巯基内酯。Kang等将高HCY血症分为：轻度15～<30μmol/L，中度30～100／μmol/L，重度>100μmol/L。

近年国内外研究发现，一些原发性高血压患者血浆同型半胱氨酸（HCY）水平明显升高，这一类高血压称为H型高血压。其血中HCY水平升高，易引起动脉粥样硬化和脏器损伤。其作用机制有以下几种：①血管内皮损伤，②平滑肌细胞增生，③血小板功能的紊乱，④脂质代谢紊乱。动脉内皮损伤，HCY可促进脂质沉积于动脉壁，泡沫细胞增加，还可改变动脉壁糖蛋白分子纤维化结构，促进斑块钙化。高HCY血症不但是原发性高血压发生的一个危险因素，可能还是一个独立的危险因素。HCY可以预测心血管事件的发生，检测血浆HCY水平对高血压的分型、预防、诊疗具有重要临床价值。

测定HCY的方法较多，在60年代只能用简单的氨基酸分析仪，方法灵敏度低、重复性差、实验数据不可靠。70年代采用第二代氨基酸分析仪检测血浆中Hcy。至80年代，发展为采用高效液相色谱法对还原成游离形式的Hcv进行测定。进入90年代，各种围绕提高分析速度，减少预处理步骤的分析方法相继出现。从近年来报道中归纳起来有：高效液相色谱法(HPL)、全自动荧光偏振免疫分析(FPLA)技术、气相色谱一质谱分析法、液相色谱一质谱分析法、高效毛细管电泳法、酶联免疫吸附法(ELISA)及放射免疫法等多种检测方法。以上方法均因为操作复杂、检测时间长、需要特殊的仪器和设备，限制了临床的推广和应用。

量子点作为一种新型的荧光染料，已广泛应用于科研领域。相对于传统的有机荧光染料和胶体金，量子点具有稳定、可定量的优点。免疫层析技术现已广泛应用于肝炎、梅毒、等传染性疾病抗原抗体及激素、药物的检测。将量子点与免疫层析技术相结合，使得该临床诊断试剂既具有稳定，可定量的优点，又能够快速、灵敏的检测特定的抗原或抗体。目前尚无量子点免疫层析技术检测同型半胱氨酸的报道和产品。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种同型半胱氨酸检测试剂盒及其制备方法。该方法以新型荧光染料量子点替代传统的胶体金，能够准确、定量、快速、灵敏的检测人血清中的同型半胱氨酸。本试剂盒所需仪器不同于以往检验科的大型昂贵仪器，只需一台小型的荧光定量分析仪即可，实现了实时检测。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种同型半胱氨酸检测试剂盒，包括检测用具，该检测用具依次设置有加样区、结合物释放区、测试区、控制区和吸水区；结合物释放区包被量子点标记的同型半胱氨酸单克隆抗体，测试区包被同型半胱氨酸，控制区包被抗鼠IgG抗体。

由于同型半胱氨酸首先与单抗结合，因此单抗的选择也非常的重要。此外，抗鼠IgG抗体的质量，是判断试剂盒及检测结果是否有效的标志。

作为信号扩增物的量子点是该试剂盒中的重点。量子点的大小、均一度、稳定性都会影响产品的最后读数。在本发明的一些实施例中，本发明提供的同型半胱氨酸检测试剂盒中，量子点粒径为5nm，激发波长为365nm，发射波长为605nm。

硝酸纤维（NC）膜承载了产品的毛细管运动，选择合适的NC膜有助于提高产品的灵敏度。在本发明的一些实施例中，本发明提供的同型半胱氨酸检测试剂盒中，测试区为硝酸纤维素膜。

在本发明的一些实施例中，本发明提供的同型半胱氨酸检测试剂盒中，结合物释放区为本领域常用材料，优选为玻璃纤维膜。

在本发明的一些实施例中，本发明提供的同型半胱氨酸检测试剂盒中，控制区为硝酸纤维素膜。