[发明专利]一种通过酶解和微生物发酵生产高效生物肽的方法

权利要求书

1.一种通过酶解和微生物发酵生产高效生物肽的方法，其特征在于，

（1）将发酵底物粉碎并混合均匀后，加水拌料，然后蒸煮灭菌；

（2）灭菌后的发酵底物温度降到50～55℃时，加入蛋白酶进行水解；

（3）发酵底物水解完毕后，温度降至28～35℃时，将混合菌液加入水解后的发酵底物中，搅拌均匀，在恒温条件下好氧发酵；

（4）发酵完毕的物料经低温烘干后进行粉碎即得到所述高效生物肽成品；

步骤（1）中，所述的发酵底物的组成为：高蛋白豆粕50～60重量份、谷氨酸菌体蛋白10～20重量份以及脱酚棉籽蛋白30～40重量份；各组分经粉碎并过40目筛后混合均匀；

步骤（3）中，所述的混合菌液为黑曲霉、热带假丝酵母、米曲霉和枯草芽孢杆菌的菌液按照1:1:1:1的比例混合得到的混合菌液；混合菌液按5～10%的重量百分比接种入水解后的发酵底物中。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中所述的加水拌料，是对发酵底物按料水比1:1～2加水后进行拌料，拌料后发酵底物的水分在40～55%之间；加入的水提前用0.1～0.2mol/L的盐酸和氢氧化钠调节pH到6.0-7.0之间；

步骤（1）中所述的蒸煮灭菌，是在115～121℃、0.07～0.11MPa条件下蒸煮灭菌20～30min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的蛋白酶为木瓜蛋白酶，按发酵底物重量的1～2‰加入40万U/g的木瓜蛋白酶。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述的水解为保持50～55℃的温度水解10～12h。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的黑曲霉菌液和米曲霉菌液是按以下方法制成的：

制备一级种子培养基：蔗糖30g、NaNO₃3g、MgSO₄·7H₂O 0.5g、KCl 0.5g、FeSO₄·4H₂O 0.014g、K₂HPO₄1.0g，蒸馏水1000mL混合均匀，调节pH为6.0～6.5，在温度115～121℃下灭菌20～30min；

制备二级种子培养基和发酵培养基：葡萄糖20kg、麦芽浸粉5kg、酵母浸粉5kg、玉米粉10kg，无菌纯水1000L，pH自然，在温度115～121℃下灭菌20～30min；

一级种子培养：1000mL三角瓶中装一级种子培养基500mL，接入菌种斜面制成浓度1.5～2.0×10⁶个/mL的孢子悬液50mL，28～30℃下以130r/min振荡培养24h；

二级种子培养：将经所述一级种子培养的菌液按照5～10%的重量比接种到二级种子罐中，在28～30℃、通风量体积比为1:0.5～1的条件下，以100r/min机械搅拌，培养24～48h；

液体发酵培养：将经所述二级种子培养的菌液按照5～10%的质量比接种到发酵罐中，在28～30℃、通风量体积比为1:0.5～1的条件下，以100r/min机械搅拌，培养24～48h。