[发明专利]用于动脉粥样硬化易损斑块早期诊断的靶向磁性纳米探针的制备方法

说明书

一、技术领域：

本发明涉及一种医学诊断试剂中的分子探针，尤其是涉及一种用于动脉粥样硬化易损斑块早期诊断的靶向磁性纳米探针的制备方法。

二、背景技术：

目前， 以急性心肌梗死和心源性性猝死为主的急性心血管事件已成为危害人类健康的头号杀手。据统计，全世界每年约有2千万人死于急性心血管事件。在我国，情况同样不容乐观，每年有超过70万人死于急性心肌梗死和心源性猝死，这已经成为严重威胁我国居民健康的最重要疾病之一。而大部分的急性心肌梗死和心源性性猝死是由易损斑块（vulnerable plaque）的破裂所导致的。易损斑块是指那些不稳定和有血栓形成倾向的斑块，主要包括破裂斑块、侵蚀性斑块和部分钙化结节性病变。大量的研究表明，大部分的急性心肌梗死是由于轻、中度狭窄的易损斑块的破裂、继发血栓形成所致 。易损斑块所导致的血管狭窄程度并不高，很多患者没有前驱症状，临床上很难早期诊断，危险性极高。因此，如何尽早准确的识别和诊断易损斑块，进行有效的干预成为亟待解决的问题。目前常用于斑块检测的技术包括冠脉造影、血管内超声(IVUS)、激光相干断层显像(OCT)等，这些技术属于有创性的检查，花费昂贵，限制了其在临床上的普及。

分子影像学是近些年迅猛发展的一门新兴学科。它能够在活体状态下从分子水平观察细胞的功能代谢（包括功能基因和蛋白的表达变化），以实现对疾病的早期诊断和疗效评价。与传统医学影像技术相比，它具有高特异性、高灵敏度等特点、能够通过无创的方法提供分子水平的信息。分子影像技术是综合分子生物学、化学、纳米技术、数据图像处理等多学科技术的成果，目前已广泛用于肿瘤的诊断和靶向治疗方面的研究。分子影像技术在心血管领域研究始于上世纪70年代末，Davis等利用¹¹¹In观察颈动脉粥样硬化斑块和髂动脉血栓。近年来，随着对动脉粥样硬化易损斑块的病理生理机制不断深入研究，一系列新的示踪分子被发现，并作为靶点应用于新型分子探针的研发。这些示踪靶点包括与斑块不稳定性相关的蛋白酶类（比如金属蛋白酶MMPs和组织蛋白酶类CCPs）、细胞粘附分子（比如ICAM-1、VCAM-1等）、巨噬细胞的表面受体（比如SR-A）以及ox-LDL的表面抗原（比如MDA2，E06和IK17等）。但是，目前用于研究的探针主要由以下两点不足之处，第一，探针的靶点几乎都是在易损斑块形成的中晚期才会表达增高，而在疾病的早期并无明显变化，因此很难利用这些靶向探针实现对易损斑块的早期诊断。第二，在不少研究中，探针载体的选择一种是表面未经处理的Fe₃O₄纳米颗粒，它在生物体内的稳定性差，易于积聚，并且停留时间短，观察时间短；另一种是小分子Gd试剂具有很强的肾毒性，特别是对肾功能不全患者危害尤甚，另外在体内停留时间过短，其临床注射剂量较大。因此，目前关于易损斑块诊断的探针的研制急需解决的两个问题是选择生物相容性好的载体以及灵敏度和特异性好的靶点。聚乙烯亚胺(PEI)是一种水溶性聚胺，具有较低的生物毒性，常用于基因转染和生物递送的载体。PEI修饰的磁性Fe₃O₄纳米颗粒表面拥有大量的活性氨基，可与许多配体、抗体和药物连接，同时用于诊断和治疗。

国内外不少最新的研究发现，在动脉粥样硬化易损斑块，肌动蛋白结合蛋白前纤维蛋白-1（profilin-1）的表达明显增加，是动脉粥样硬化易损斑块形成的早期病理性标志之一，它本身也会进一步促进斑块的形成和发展，其机制可能与促进氧化型血脂成分的炎症应激反应有关。而profilin-1基因的缺失可以降低氧化低密度脂蛋白诱导的炎症介质的水平，改善内皮功能发挥保护作用。最新发表于《Nature cell biology》一项研究显示profilin-1的表达及磷酸化水平与内皮细胞的功能障碍和病理性的血管新生密切相关。大量的研究证实血管新生正是易损斑块形成和发展的始动因素之一，因此，profilin-1有望成为易损斑块的诊断和治疗的新靶点。

三、发明内容：

本发明为了解决上述背景技术中的不足之处，提供一种用于动脉粥样硬化易损斑块早期诊断的靶向磁性纳米探针的制备方法，其用于早期预警易损斑块的实验研究，为创新型诊断试剂的研发和推广提供实验数据支持，不仅可以有效的早期发现和预警不稳定斑块， 还可以评价抗动脉粥样硬化新型药物的疗效。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为 ：