[发明专利]修饰的米曲霉乳糖酶及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201210487038.7 | 申请日： | 2012-11-26 |
| 公开（公告）号： | CN102994477A | 公开（公告）日： | 2013-03-27 |
| 发明（设计）人： | 赵从波;陈文杰;马清河;章淑艳;李军;王云鹏;秦艳梅 | 申请（专利权）人： | 河北省微生物研究所 |
| 主分类号： | C12N9/38 | 分类号： | C12N9/38 |
| 代理公司： | 北京市德权律师事务所 11302 | 代理人： | 刘丽君 |
| 地址： | 071051 河*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 修饰 曲霉 乳糖酶 及其 制备 方法 应用 | ||
1.聚乙二醇修饰的米曲霉乳糖酶，其特征在于，其结构通式为：R1-NH-R2；
其中，R1为活化的聚乙二醇或活化的聚乙二醇衍生物；
R2为去除一个氨基的米曲霉乳糖酶分子。
2.按照权利要求1所述的聚乙二醇修饰的米曲霉乳糖酶，其特征在于：所述的活化的聚乙二醇是单甲氧基聚乙二醇；
所述的活化的聚乙二醇衍生物选自单甲氧基聚乙二醇三氟乙基磺酸酯、单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯、单甲氧基聚乙二醇苯并三唑碳酸酯、单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯、甲酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯、乙酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯、丙酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯、丁酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯、单甲氧基聚乙二醇甲醛或单甲氧基聚乙二醇乙醛。
3.按照权利要求1所述的聚乙二醇修饰的米曲霉乳糖酶，其特征在于：所述的聚乙二醇是直链的聚乙二醇或是带支链的聚乙二醇，聚乙二醇的分子量为5000～20000。
4.一种制备权利要求1-3任何一项所述聚乙二醇修饰的米曲霉乳糖酶的方法，该方法包括以下步骤：将米曲霉乳糖酶溶液的pH值调节为弱酸性或中性，加入活化的聚乙二醇或活化的聚乙二醇衍生物进行修饰反应，得到聚乙二醇修饰的米曲霉乳糖酶。
5.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：将米曲霉乳糖酶溶液的pH值调节为4.5～7.5，优选为5.5。
6.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：所加入的活化的聚乙二醇或活化的聚乙二醇的衍生物与米曲霉乳糖酶的摩尔比为3～20：1，优选为15～20：1,更优选为16～20：1,最优选为16：1。
7.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：所述的修饰反应的温度为4～37℃，优选为20～25℃，最优选为25℃。
8.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：所述的修饰反应的时间为10～120分钟，优选为25～40分钟,最优选为30分钟。
9.按照权利要求4所述的方法，其特征在于：
所述的所述的活化的聚乙二醇是单甲氧基聚乙二醇；
所述的活化的聚乙二醇衍生物选自单甲氧基聚乙二醇三氟乙基磺酸酯、单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺碳酸酯、单甲氧基聚乙二醇苯并三唑碳酸酯、单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯、甲酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯、乙酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯、丙酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯、丁酸甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺酯、单甲氧基聚乙二醇甲醛或单甲氧基聚乙二醇乙醛。
10.按照权利要求4所述的方法，其特征在于，还包括以下步骤：将反应产物依次经过离子交换层析和凝胶过滤层析提纯，去除游离的聚乙二醇和未反应蛋白，得到纯化的聚乙二醇修饰的米曲霉乳糖酶。
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