[发明专利]一种植物样品中内源性油菜素甾醇的定量检测方法

权利要求书

1.一种植物样品中内源性油菜素甾醇的定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）提取内源性油菜素甾醇：准确称量植物样品后将其置于研钵中，液氮冷冻研磨至粉末状后，加入同位素内标[²H₃]油菜素内酯和[²H₃]油菜素甾酮，以乙腈提取后，-18℃以下放置12 h以上；

2）除水：对步骤1）提取后的样品进行除水；

3）固相萃取除杂：将步骤2）除水后的样品溶液通过活化后的双层固相萃取小柱，解吸后收集上样流出液和解吸液，除去样品中的溶剂；

4）液液萃取除杂：将步骤3）所得的样品以乙醚溶解，涡旋静置后弃水相，加入pH为2~10的缓冲溶液，涡旋静置后弃水相，重复除杂3次或3次以上，取乙醚相，吹干，定容；

5）定容检测：将步骤4）定容后的样品进入高效液相色谱-电喷雾-串联质谱分析，测量出油菜素甾醇。

2.根据权利要求1所述的一种植物样品中内源性油菜素甾醇的定量检测方法，其特征在于：所述的双层固相萃取小柱的填料为石墨化碳黑/乙二胺-N-丙基键合硅胶。

3.根据权利要求1或2所述的一种植物样品中内源性油菜素甾醇的定量检测方法，其特征在于：所述的除水是将步骤1）提取后的样品离心，取上清液，向上清液中加入氯化钠，用涡旋混合仪剧烈震荡使水相与有机相分层，弃水相，再向有机相中加入无水硫酸镁除水。

4.根据权利要求1或2所述的一种植物样品中内源性油菜素甾醇的定量检测方法，其特征在于：所述的缓冲溶液是用磷酸氢二钠、甲酸铵等缓冲盐配制的水溶液。