[发明专利]双峰驼内收蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，是一种双峰驼内收蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法。

背景技术

内收蛋白（Adducin）是一个红细胞膜骨架蛋白质。由α和β或α和γ两个亚基组成的二聚体，它的形态似不规则的盘状物，高5.4nm,直径12.4nm。每个红细胞约有30000个分子。内收蛋白可与肌动蛋白及血影蛋白复合体结合，并且通过Ca²⁺和钙调蛋白的作用影响骨架蛋白的稳定性，从而影响红细胞的形态。

研究发现，内收蛋白是一种具有多种生物学功能的蛋白质，是一种无处不在的细胞膜骨架蛋白。目前认为它参与了细胞连接、膜离子转运和信号传递的过程。内收蛋白集中在膜收缩蛋白结点以结合钙调蛋白并且在体内是蛋白激酶（PCK）和Rho-联合激酶的作用物。内收蛋白亚基和序列有关而且都包含在氨基末端球形区、颈区和羧基端敏感蛋白酶尾部区。所有内收蛋白亚基的尾部区以高度保守的富含丙氨酸的豆蔻酰化的激酶C底物（MARCKS）的22-残基领域结束。内收蛋白覆盖了肌动蛋白丝的快速生长端，也优先补充了膜收缩蛋白尾丝。内收蛋白与钙调蛋白结合，并可以与血影蛋白-肌动白复合体结合，促使血影蛋白组装于该复合体。对装配和维持血影蛋白-肌动蛋白网络起重要作用。

内收蛋白的研究，人类α-内收蛋白cDNA存在Gly460Trp多态性，表现为第640位碱基由G替换为T，从而导致编码该蛋白第460位的甘氨酸（Gly）替换为色氨酸（Trp）。在高加索人种无亲缘关系的群体研究中发现，原发性高血压(EH)患者中，Gly460Trp杂合子的的频率明显高于正常对照者。在家系内进行连锁分析，也发现该基因附近位点与EH连锁。在1997年，Barlassina等人对α-Adducin的遗传性和原发性高血压病人对盐的感受性进行了研究。

在双峰驼中，细胞需要内收蛋白进行细胞连接、膜离子转运和信号传递的过程。是维持细胞膜骨架蛋白稳定性不可缺少的一种蛋白质。对红细胞形态有十分重要的影响。

发明内容

本发明通过克服现有技术之不足，提供了一种双峰驼内收蛋白基因、重组蛋白及其克隆方法，该内收蛋白是维持细胞膜骨架蛋白稳定性不可缺少的一种蛋白质，对红细胞形态有十分重要的影响。

本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种双峰驼内收蛋白基因，该基因的核苷酸序列具有SEQ ID NO.1所示的序列。

下面是对上述发明技术方案之一的进一步优化或/和改进：

上述基因的核苷酸序列可具有SEQ ID NO.1中108-1412位的序列。

本发明的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种含有双峰驼内收蛋白基因的重组蛋白。

下面是对上述发明技术方案之二的进一步优化或/和改进：

上述重组蛋白的氨基酸序列具有SEQ ID NO.2所示的序列。

上述重组蛋白可具有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的多肽、或其保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。

上述重组蛋白可通过设计一对引物从双峰驼内收蛋白中得到双峰驼内收蛋白基因，该引物对的核苷酸序列信息如下：

正引物，SEQ ID NO.3（正向）：5’- ATGAATGGTGATACTCGGGCG -3’，

反引物，SEQ ID NO.4（反向）：Oligo dT。

本发明的技术方案之三是通过以下措施来实现的：一种双峰驼内收蛋白基因的克隆方法，按下述步骤进行：

第一步，总RNA提取，采取双峰驼组织样品后，对组织样品进行组织总RNA提取；

第二步，引物设计及合成，引物对的核苷酸序列信息如下：

正引物，SEQ ID NO.3（正向）：5’- ATGAATGGTGATACTCGGGCG -3’，

反引物，SEQ ID NO.4（反向）：Oligo dT；

第三步，RT-PCR扩增，利用反转录试剂盒对组织样品中的蛋白基因进行反转录，并对待扩增的DNA片段进行RT-PCR扩增；