[发明专利]一种三角帆蚌的可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因、蛋白及其抗体的制备方法

权利要求书

1.一种三角帆蚌的可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因，其特征在于：具有SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

2.一种三角帆蚌的可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体蛋白质，其特征在于：具有SEQ ID NO.2 所示的氨基酸序列。

3.一种如权利要求1所述的三角帆蚌的可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的抗体的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

1）以三角帆蚌血淋巴细胞的总RNA为模板，反转录成cDNA，扩增sTRAIL蛋白基因的寡聚核苷酸引物,所述的引物具有SEQ ID NO.3 所示的核苷酸序列的，利用PCR技术获得具有SEQ ID NO.1所示的sTRAIL的基因编码框核苷酸序列；

2）利用DNA重组技术将sTRAIL基因编码框的序列片段克隆到合适的pMD19-T载体中，再经限制性内切酶酶切，与经同样酶切的pET-28(a) 原核表达载体连接，利用PCR法筛选阳性克隆，经测序鉴定获得编码框正确的重组表达载体pET-28a(+)-sTRAIL；

3）将阳性重组质粒pET-28(a)- sTRAIL转化到表达宿主菌E. coli Rossetta（DE3 ），用异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）进行检测；

4）将阳性表达菌液扩大培养，利用蛋白质纯化试剂盒分离纯化重组蛋白质，制得的重组蛋白质具有SEQ ID NO.2 所示的氨基酸序列；

5)用纯化得到sTRAIL重组蛋白免疫新西兰大白兔，经过一次初始免疫和三次加强免疫后，颈动脉取血，分离血清，获得sTRAIL多克隆兔抗血清。