[发明专利]一种志贺氏菌的胶体金快速检测卡及其制备方法

权利要求书

1.一种检测志贺氏菌的胶体金快速检测卡，其特征在于：检测卡外壳、支撑底板、样品垫、紧密连接与样品垫一段的含有抗志贺氏菌O抗原单克隆抗体一，标记胶体金探针的金标垫、与金标垫另一端连接的硝酸纤维素膜和连接于硝酸纤维素膜另一端的吸收垫；硝酸纤维素膜喷涂有相互平行的两条印迹带检测T线和质控C线，将待测样品从检测卡外壳加样孔滴入，待5～15分钟后读取T、C线的显色，得到结果。

2.一种检测志贺氏菌的胶体金快速检测卡制备方法，其特征在于：T线喷涂与抗志贺氏菌O抗原单克隆抗体一配对的抗志贺氏菌O抗原单克隆抗体二，C线喷涂羊抗鼠IgG抗体；其制备步骤为：(1)采用志贺氏菌群特异性O抗原作为免疫原，采用常规方法制备抗志贺氏菌群特异性O抗原单克隆抗体；(2)采用ELISA法筛选出配对的抗志贺氏菌群特异性O抗原单克隆抗体一和抗志贺氏菌群特异性O抗原单克隆抗体二；(3)用柠檬酸纳还原法制备30nm的胶体金颗粒，用该胶体金颗粒标记经过纯化的抗志贺氏菌群特异性O抗原单克隆抗体一，将100mL0.01％的氯金酸溶液与1.2mL1％的柠檬酸三钠水溶液混合加热至沸腾，持续煮沸5分钟，最后加超纯水至100mL，制得30nm的胶体金溶液，在搅拌条件下，向胶体金溶液中加入单克隆抗体，使其终浓度为15μg/mL；(4)将步骤三所得的已标记的抗志贺氏菌群特异性O抗原单克隆抗体一喷涂到金标垫上，将抗志贺氏菌群特异性O抗原单克隆抗体二喷涂T线，将羊抗鼠IgG抗体喷涂C线，组装检测卡。