[发明专利]两步酶促法制备结合态熊去氧胆酸的方法有效
| 申请号： | 201210473483.8 | 申请日： | 2012-11-21 |
| 公开（公告）号： | CN102994604A | 公开（公告）日： | 2013-03-27 |
| 发明（设计）人： | 王伯初;谭君;娄德帅;祝连彩;刘绍勇;岑小惜;季庆治 | 申请（专利权）人： | 上海凯宝药业股份有限公司 |
| 主分类号： | C12P33/00 | 分类号： | C12P33/00 |
| 代理公司： | 北京海虹嘉诚知识产权代理有限公司 11129 | 代理人： | 谢殿武 |
| 地址： | 201401 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 两步酶促 法制 结合 态熊去氧 胆酸 方法 | ||
1.两步酶促法制备结合态熊去氧胆酸的方法，包括如下步骤：（1）在7α-羟基类固醇脱氢酶和氧化型辅酶NAD+或NADP+存在的条件下将溶于水溶液中的底物结合态鹅去氧胆酸的7位α-羟基氧化成羰基，形成中间产物结合态7-羰基-石胆酸；（2）在步骤（1）反应后的混合物中，向混合物中加入7β-羟基类固醇脱氢酶和还原型辅酶NADH或NADPH，将中间产物7位羰基还原成β-羟基得到结合态熊去氧胆酸。
2.根据权利要求1所述的方法，所述的水溶液的pH值为7-9。
3.根据权利要求1所述的方法，所述的水溶液为pH8.5磷酸盐缓冲液。
4.根据权利要求1所述的方法，所述步骤（1）、（2）的反应温度为30℃，反应时间为1-3小时。
5.根据权利要求1所述的方法，所述的结合态鹅去氧胆酸包括牛磺鹅去氧胆酸见式（1）、甘氨鹅去氧胆酸见式（2）；结合态熊去氧胆酸包括牛磺熊去氧胆酸见式（3）、甘氨熊去氧胆酸见式（4）。
。
6.根据权利要求1所述的方法，所述的7α-HSDH和7β-HSDH转化的底物是以单体形式存在或者以天然混合物状态存在。
7.根据权利要求1所述的方法，所述的天然混合物状态包括禽畜胆汁。
8.根据权利要求7所述的方法，禽畜胆汁包括鸡、鸭、鹅、牛、狗、兔、羊的胆汁。
9.根据权利要求1所述的方法，所述的7α-羟基类固醇脱氢酶和7β-羟基类固醇脱氢酶来自于微生物。
10.根据权利要求1所述的方法，所述7α-羟基类固醇脱氢酶来自撒丁岛梭菌（Clostridium sardiniense，ATCC27555）和脆弱拟杆菌（Bacteroides fragilis ATCC25825）；所述7β-羟基类固醇脱氢酶来自撒丁岛梭菌（Clostridium sardiniense，ATCC27555）和产气柯林斯菌(Collinsella aerofaciens，ATCC25986)。
11.根据权利要求1所述的方法，所述的7α-HSDH和7β-HSDH是在非致病微生物中的表达产物。
12.根据权利要求1所述的方法，所述非致病微生物为大肠杆菌。
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