[发明专利]一种乳杆菌及利用其发酵生产D-乳酸的方法

权利要求书

1.一种乳杆菌，其特征在于，所述菌株为乳杆菌（Lactobacillus sp.）DMDL9010，于2011年8月19日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，简称CGMCC，保藏编号为CGMCC NO. 5172。

2.一种利用权利要求1所述的乳杆菌（Lactobacillus sp.）DMDL9010发酵生产D-乳酸的方法，其特征在于，包括如下步骤和工艺条件：

第一步：将乳杆菌（Lactobacillus sp.）DMDL9010的冻干粉0.1~0.5g置于种子培养基中，每5~10 mL培养基加入冻干粉0.1~0.5g，于20~35℃静止培养20~28h，制成第一次种子液；

第二步：以体积比为5~10：100的比例，将第一次种子液接入种子培养基中，于20~35℃静止培养20~28h，制成第二次种子液；

第三步：以体积比为5~10：100的比例，将第二次种子液接入种子培养基中，于20~35℃静止培养20~28h，制成第三次活化液；

第四步：以体积比为（2~8）：100的比例，将第三步得到的第三次活化液接入到发酵培养基中，加入中和剂调节发酵培养基的pH为6.0~7.0，于20~35℃下，在搅拌转速为100~150rpm的发酵罐中发酵，得到D-乳酸。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述种子培养基的配方为：以重量份数计，蛋白胨0.8~1.2份，酵母粉0.2~0.8份，葡萄糖1.5~2.5份，柠檬酸三胺0.1~0.3份，七水合硫酸镁0.01~0.03份，牛肉膏0.5~1.5份，磷酸氢二钾0.05~0.35份，四水合硫酸锰0.001~0.009份，乙酸钠0.05~0.35份，吐温80 0.05~0.15份，蒸馏水92.8~96.7份；所述种子培养基的制备方法为：按配方称取上述原料搅拌溶解均匀后用0.08~0.10MPa灭菌15~20min，冷却至20~35℃备用；所述种子培养基的pH为6.0~7.0。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述发酵培养基的配方为：以重量份数计，糖度为15~25%的淀粉质水解液或生物质糖液60~80份，蛋白胨0.8~1.2份，酵母粉0.2~0.8份，牛肉膏0.5~1.5，葡萄糖1.5~2.5份，柠檬酸三胺0.1~0.3份，七水合硫酸镁0.01~0.03份，磷酸氢二钾0.05~0.35份，四水合硫酸锰0.001~0.009份，乙酸钠0.05~0.35份，吐温80 0.05~0.15份，抗坏血酸0.02~0.04份，蒸馏水10.8~35.9份；所述发酵培养基的制备方法为：按配方称取上述原料搅拌溶解均匀后用0.08~0.10 MPa灭菌15~20 min，冷却至20~35 ℃，加入0.5~2.0份的95%的乙醇，搅拌均匀后备用；所述发酵培养基的pH为6.0~7.0。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述淀粉质水解液的制备方法为：将60~200目的淀粉质粉体加水配制成体积百分比为15~30%的溶液，以每100g干淀粉加入α-淀粉酶为0.02~0.04mL，在70~80℃保温30~40min，然后在90~100℃液化60~90min，降温至60~65℃，以每100g干淀粉加入糖化酶0.05~0.15mL，于60~65℃保温30~60min后离心取上清液即为淀粉质水解液；所述淀粉质粉体为玉米淀粉、木薯淀粉、马铃薯淀粉、大米粉或糙米粉中的一种或两种以上。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述生物质糖液为甘蔗糖液、蔗糖液、纤维素水解液、半纤维素水解液、半乳糖液或木糖液，以及由纤维二糖、果糖、葡萄糖、麦芽糖、甘露糖、核糖或山梨糖中的一种或两种以上糖组成的混合液。

7.根据权利要求2~6所述的方法，其特征在于，第四步中所述搅拌的过程中采用氧化还原电位的变化进行转速控制，使氧化还原电位为-150~-180，同时利用手性柱高效液相色谱法测定D-乳酸的含量确定发酵终点。

8.根据权利要求2~6任意一项所述的方法，其特征在于，第四步中发酵时间为108~144 h。