[发明专利]植物根部特异表达Bt-Cry5B晶体蛋白在根结线虫防治中的应用

权利要求书

1.用于在植物根部特异表达Bt-Cry5B基因的重组表达载体pBP-bt05,其骨架载体为pBI121。

2.转入有权利要求1所述重组表达载体的菌株。

3.根据权利要求1所述的菌株，指转入有pBP-bt05的根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）EHA 105。

4.一种研究苏云芽孢杆菌基因功能的新方法,其特征在于，将权利要求1所述的重组表达载体转化到根癌农杆菌中，然后转化植物，通过观察转基因植株，确定此基因对根结线虫的防治效果。

5.一种获得抗根结线虫的转基因植物的方法，包括如下步骤：

（1）构建含有苏云金芽孢杆菌的Bt-Cry5B基因的根部特异性重组表达载体，

（2）将重组表达载体转入到宿主植物中，筛选能够表达Bt-Cry5B蛋白的阳性转化子，

所述根部特异性表达苏云金芽孢杆菌的Bt-Cry5B基因的重组载体是pBP-bt05。

6.根据权利要求5所述的方法，所述将重组表达载体转入到番茄中，筛选能够表达Bt-Cry5B蛋白的阳性转化子，包括如下步骤：

（1）准备植物转化外植体，

（2）制备农杆菌转化液，所述农杆菌指转入有pBP-bt05的根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）EHA105，

（3）农杆菌转化液侵染外植体，然后共培养，

（4）对共培养的外植体进行选择培养以分化愈伤组织，

（5）生根培养分化的愈伤组织获得转基因植株。

7.根据权利要求6所述的方法，

所述准备植物转化外植体包括外植体预培养，指将取自番茄幼苗的外植体放置在MS+50μg/μl乙酰丁香酮的固体培养基上，光照预培养2天，

所述共培养指采用MS+100μg/μl乙酰丁香酮的固体培养基，避光培养2天，

所述选择培养指采用MS+2mg/L 6BA+0.2mg/L IAA+300mg/L羧苄青霉素+50μg/ml卡那霉素+10μg/ml玉米素的培养基，26-28℃，光照培养16h，

所述生根培养指长到2～3厘米的分化良好的愈伤组织转移到生根培养基MS+0.25mg/LIAA+25μg/ml卡那霉素+200μg/ml头孢霉素上。

8.根据权利要求5～7任一所述的方法，所述制备农杆菌转化液指采用1/2浓度的液体MS＋200μg/μl的乙酰丁香酮为悬浮剂悬浮菌体。