[发明专利]一种海参用抗溶藻弧菌营养增强剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明主要涉及海产品疾病检测技术领域，具体涉及海产品致病微生物防治营养粉，尤其是一种海参用抗溶藻弧菌营养增强剂的制备方法。

背景技术

我国海域辽阔，自然条件优越，海洋资源十分丰富。但目前开发利用的程度还很低。这也说明我国开发利用海洋资源的潜力巨大，辽宁海域是中国重要的海洋生物资源、渔业资源宝库，其盛产海参、扇贝、贻贝、牡蛎和鱼、虾以及藻类等，带动海洋经济发展。加强多边和双边的海洋开发国际合作，集中集约开发利用海域及海岛资源，合理配置优势海洋产业，科学高效开发海洋资源，积极开展科研与试验、开发与利用，海水养殖标准化是合理开发海水养殖资源的重要手段，研究制定海产品养殖标准，合理开发海水滩涂养殖资源，提高养殖海产品疾病是当今养殖业的重点内容。

海产品养殖是一项高风险的养殖业，传统的小户的海产品养殖给养殖户带来了巨大的市场和技术风险。为了将养殖户养殖风险降到最低，开展对各类养殖业，包括鱼、虾、蟹、海参、鲍鱼、贝类、海藻等各类海产品的疾病防治工作任务举足轻重。有报道称，霍乱弧菌、漂浮弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌等有害细菌，是引起海产品各种疾病的罪魁祸首。

世界海参养殖以刺参（温带种）和糙海参（热带种）为主要品种。除中国、日本、韩国主要养殖刺参外，其他国家均以糙海参为主要养殖对象。近年来，随着自然资源的减少和消费需求的增加，海参的人工养殖在一些国家逐渐兴起。其中，中国和日本是主要的养殖国家，印度、印度尼西亚、越南、菲律宾、韩国、埃及等也有小规模的增养殖。

刺参(Apostichopus japonicus)是我国有记载的20余种食用海参中价值最高、惟一分布于黄渤海域的温带种。其蛋白质含量高,糖类丰富,脂类含量低,且不含胆固醇,具有很高的营养保健和药用价值,被人们视为重要的海珍品,因而具有重要的市场价值。近年来,海参消费需求量的逐年增加导致了世界范围内海参自然资源的过度开发和种群数量的急剧下降，因此，海参的人工养殖也随之发展起来。随之而来的是海参养殖中遇到的各类问题。

溶藻弧菌病是指由各种类型溶藻弧菌所引起的对人类、以及海洋生物等不同形式的总称。溶藻弧菌可引起刺参溃疡病，发病症状为：患病刺参体表溃疡，粘液增多，吐肠，1/4出现肿嘴，最后自溶死亡。溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)属于弧菌科（Vibrionaceae），弧菌属（Vibrio），革兰氏阴性短杆菌，无芽孢、荚膜，单独存在或尾端相连成“C”或“S”形，为嗜盐嗜温性、兼性厌氧海生弧菌，适宜温度为17～35℃。溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)作为一种革兰氏阴性嗜盐菌,广泛存在于世界各地海水和海产品中,是许多海水养殖动物的致病菌。近年来在养殖生产上出现了较为严重的耐药性现象,给养殖业带来了很大的危害,这很可能与溶藻弧菌生物被膜的形成有关。溶藻弧菌还能引起人类食物中毒。溶血毒素、耐热性肠毒素（ST）和不耐热性肠毒素（LT）是致病性微生物中常见的致病因子。

发明内容

由背景技术可见,提高刺参自身的免疫力,增强其抗病力是解决刺参病害问题的重要途径。本研究为达到防治养殖业中海参患病的目的，避免在海参疾病防治中使用抗生素，本发明所述的海参用抗溶藻弧菌营养增强剂的制备方法，采用以下技术方案实现：其包括以下步骤：

（1）增菌：从溶藻弧菌标准菌株的单一菌落中，挑取一菌环，接种到营养肉汤培养基中，3-5%的体积比接种，进行发酵，32~37℃培养24~48h，至菌悬液菌含量的终浓度为107~1010cfu/g；制得发酵产物；

（2）洗涤：将步骤（2）获得的发酵产物，以1:50的质量比与PBS缓冲液混合，充分搅拌1~5min后，以4000~8000rpm转数离心2~5min，以收集菌体；

（3）灭活处理：在收集的菌体中，按1:50的质量比加入PBS缓冲液，再向混合液体中，按1：1000~4000重量比加入β-丙内脂，100rmp振摇条件下，于4℃放置24h，然后于37℃放置2小时使其水解；

（4）干燥：上述步骤（3）所得的灭活产物喷雾干燥到营养饲料中，干燥24~36h，灭活产物与营养饲料总重量比为1：2~10，产物水份含量为2~5%，制得海参用抗溶藻弧菌营养增强剂；

所述的营养饲料为：黄粉虫沙50～70份；马尾藻粉：25～40份；海蒿子15～35；大豆蛋白10～15份；鱼粉：5～10份；螺旋藻2～5份；贻贝粉2～5份；低聚壳聚糖：1～4份；复合多维1～4份；复合多矿1～4份。