[发明专利]一种多聚半乳糖醛酸酶PG8fn及其基因和应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种多聚半乳糖醛酸酶PG8fn及其基因和应用。

背景技术

果胶是一类带负电的高分子多糖，由不同酯化度的半乳糖醛酸以α-1,4糖苷键聚合而成的多糖链，常带有鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖、木糖、海藻糖、芹菜糖等组成的侧链，游离的羧基部分或全部与钙、钾、钠离子，特别是与硼化合物结合在一起(Stevenson et al.,1988)。它存在于所有的高等植物中，沉积于初生细胞壁和细胞间层，在初生壁中与不同含量的纤维素、半纤维素、木质素的微纤丝以及某些伸展蛋白相互交联，使各种细胞组织结构坚硬，表现出固有的形态(O′Neill et al.,2004)。

由于果胶酶能够有效降解果胶质，因此成为不同的工业领域中的新兴酶类。果胶酶中多聚半乳糖醛酸酶在食品行业中有比较广泛的应用，其通常用于果汁的提取和澄清。果汁中存在大量的果胶物质，果胶导致果汁的黏度加大并且混浊(岳强等,2005)。因此在食品工业中，人们利用果胶酶来澄清果汁，它能使果汁过滤的时间缩短很多(屈慧鸽等，2005)。比如用果胶酶处理香蕉、葡萄和苹果等的果肉，能够提高果汁的产量。高比活的多聚半乳糖醛酸酶PG8fn由于其在弱酸性条件下具有较高的酶活且pH稳定性良好，相对于极酸多聚半乳糖醛酸酶有其特有的应用优势。

发明内容

本发明的目的是提供一种能高效应用的多聚半乳糖醛酸酶。

本发明的再一目的是提供编码上述多聚半乳糖醛酸酶的基因。

本发明的另一目的是提供包含上述基因的重组载体。

本发明的另一目的是提供包含上述基因的重组菌株。

本发明的另一目的是提供一种制备上述多聚半乳糖醛酸酶的基因工程方法。

本发明从Chaetomium luteum XZ8中分离得到一种多聚半乳糖醛酸酶PG8fn，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

MIPSVLILSLGALAAANPLPAKRASCTFTDAASAISGKKSCSTITLKDITVPAGTTLDLTKLNDGTKVIFSGKTSFGYKEWAGPLISVSGNNIHVEGAPGHVIDGNGAKWWDTKGSNGGKKKPKFFYAHSMKNSNIKGLNVKNTPVQAFSINGAENLGVYDVHLDNSAGDSQGGHNTDAFDVGSSNGVYISGAVVKNQDDCLAINSGTNITFTGGSCSGGHGLSIGSVGGRKDNTVKTVRILNSSISNSQNGVRIKTVYGAKGSVSDVEYSGITLSNISKYGIVIEQDYENGSPTGKPTNGVPITDLTVKGVTGTVKSGATDVYILCAKGACSNWKWSGVSVTGGKKSSKCSNVPSPASC

该酶包括360个氨基酸，N端16个氨基酸预测为信号肽序列。

因此，成熟的多聚半乳糖醛酸酶PG8fn的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

NPLPAKRASCTFTDAASAISGKKSCSTITLKDITVPAGTTLDLTKLNDGTKVIFSGKTSFGYKEWAGPLISVSGNNIHVEGAPGHVIDGNGAKWWDTKGSNGGKKKPKFFYAHSMKNSNIKGLNVKNTPVQAFSINGAENLGVYDVHLDNSAGDSQGGHNTDAFDVGSSNGVYISGAVVKNQDDCLAINSGTNITFTGGSCSGGHGLSIGSVGGRKDNTVKTVRILNS SISNSQNGVRIKTVYGAKGSVSDVEYSGITLSNISKYGIVIEQDYENGSPTGKPTNGVPITDLTVKGVTGTVKSGATDVYILCAKGACSNWKWSGVSVTGGKKSSKCSNVPSPASC

信号肽序列为mipsvlilslgalaaa（SEQ ID NO.3）.

本发明提供了编码上述多聚半乳糖醛酸酶基因PG8fn，具体地，该基因的基因组序列（含有两个内含子）如SEQ ID NO.4所示。