[发明专利]一种肠炎沙门氏菌PCR检测引物

说明书

技术领域

本发明主要涉及食品质量检测领域，属于微生物检测方法，具体涉及一种沙门氏菌PCR检测引物。

背景技术

沙门氏菌(Salmonella Enteritidis)为肠杆菌科沙门氏菌属，据其抗原结构和生化试验，目前已有2000余种血清型，其中以鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌和猪霍乱沙门氏菌较为多见。该菌为革兰氏阴性杆菌，需氧，不产生芽胞，无荚膜，绝大多数有鞭毛，能运动。对外界的抵抗力较强，在水和土壤中能活数月，粪便中能活1～2个月，在冰冻土壤中能越冬。不耐热，55℃、1h或60℃、10～20分钟死亡，5%石炭酸或1：500升汞5分钟内即可将其杀灭。多种家畜（猪、牛、马、羊）、家禽（鸡、鸭、鹅）、鱼类、飞鸟、鼠类及野生动物的肠腔及内脏中能查到此类细菌。细菌由粪便排出，污染饮水、食物、餐具以及新鲜蛋品、冰蛋、蛋粉等，人进食后造成感染。致病食物以肉、血、内脏及蛋类为主，值得注意的是该类细菌在食品中繁殖后，并不影响食物的色、香、味。

沙门氏菌属有的专对人类致病，有的只对动物致病，也有对人和动物都致病。沙门氏菌病是指由各种类型沙门氏菌所引起的对人类、家畜以及野生禽兽不同形式的总称。感染沙门氏菌的人或带菌者的粪便污染食品，可使人发生食物中毒。据统计在世界各国的种类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜首。我国内陆地区也以沙门氏菌为首位。

由沙门氏菌引起的食源性疾病的全球公共健康问题。在欧洲ISO6579:2002和FSISMLG4.04中；检测沙门氏菌是评估产品是否合格的必检项目。在美国，通常是肉，禽，蛋产品中检测出沙门氏菌。

由沙门氏菌引起了食源性疾病的全球公共健康问题。沙门氏菌是最常见的，新鲜家禽和猪的肉阳性标本的比例，根据欧洲标准（欧盟委员会法规2073/2005）用于评价产品是否符合标准，经分别检测平均为5.5％和1.1％。此外，美国食品安全检验局采用FSIS的方法，检测沙门氏菌。这两个标准的用于检测沙门氏菌培养方法（SCMS）需要长达5天，才能获得结果。这些方法包括预培养，在选择性琼脂上选择性分离，可疑菌落的生化鉴定和血清学确认。该方法是虽然准确，但费力，成本高，费时，且对短保质期的产品无法检测。目前，检测沙门氏菌的方法检测时间长，费用较高，不利于在基层单位推广使用。

因此，需要有新的方法能够在一个短的时间内检测，最好能在24小时之内，在一个给定的食物量中检测食品中的病原体。

发明内容

本研究的目的是：建立一个新的检测食品中的病原体的方法。为达到直接在食品中肠炎沙门氏菌(Salmonella Enteritidis)检测的目的。本发明采用Primer Express1.5软件中设计的引物，提供一种沙门氏菌PCR检测引物，其为：

F：CACCAGGAGATTACAACATGACG    SEQ ID No.1

R：CTAGCTCACACCAAAAGTGACCA    SEQ ID No.2。

其中，所述的引物扩增片段为180bp左右的片段，根据电泳结果，即可判断为是否存在病原体基因。

本发明还提供含有上述引物的沙门氏菌PCR检测试剂盒，所述试剂盒还可包括PCR缓冲液、dNTPs、纯化水和Taq DNA聚合酶等。

本发明的上述引物，可以广泛的应用在检测食品中、水体中、畜禽饲料中的肠炎沙门氏菌检测等方面。

本发明还提供应用上述的试剂盒在食品中检测沙门氏菌的方法，其包括：

1)提取食品中的DNA；

2)以步骤1提取的DNA为模板进行PCR扩增；

3)对PCR产物进行电泳检测。

其中，所述的PCR反应体系为：每20μl的反应液中，含有(1)引物上、下游各15mM，100μl；(2)10×PCR缓冲液，1.5ml；(3)10mM dNTPs，1.5ml；(5)5U/μl Taq DNA聚合酶，100μl；(4)纯化水，3.0ml。

(1)引物上、下游各15mM，100μl；

(2)10×PCR缓冲液(含Mg²⁺20mM)，1.5ml；

(3)dNTPs(10mM)，1.5ml；

(4)纯化水，3.0ml；

(5)Taq DNA聚合酶(5U/μl)，100μl。

其中，所述的PCR反应条件为：95℃预变性1min，95℃变性30s，60℃退火50s，72℃延伸1min，共35个循环，最后72℃延伸10min。