[发明专利]PCR法检测蚕卵中家蚕微粒子虫的样本处理方法及检测方法有效
| 申请号： | 201210465681.X | 申请日： | 2012-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN102925583A | 公开（公告）日： | 2013-02-13 |
| 发明（设计）人： | 鲁兴萌;蔡顺风;李明乾;马焕艳;何永强;李光才 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 杭州天勤知识产权代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡红娟 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | pcr 检测 蚕卵 家蚕 微粒子 样本 处理 方法 | ||
1.一种蚕卵样本的处理方法，其特征在于，包括：将蚕卵样本加入前处理液中，放置30min以上，捣碎蚕卵并调节溶液pH值为中性，制得PCR模板；所述前处理液为碱性且包含1～10mol/L的甜菜碱。
2.如权利要求1所述的处理方法，其特征在于，所述甜菜碱浓度为5～8mol/L。
3.如权利要求2所述的处理方法，其特征在于，所述甜菜碱浓度为5mol/L。
4.如权利要求1所述的处理方法，其特征在于，所述放置的时间为30～120min。
5.如权利要求1所述的处理方法，其特征在于，所述前处理液包含0.5～2mol/L的NaOH。
6.如权利要求5所述的处理方法，其特征在于，所述前处理液包含1mol/L的NaOH。
7.如权利要求1所述的处理方法，其特征在于，所述调节溶液pH值的试剂为盐酸。
8.一种蚕卵中家蚕微粒子虫的检测方法，包括：
(1)取蚕卵样本，利用权利要求1～5任一所述的处理方法对蚕卵样本进行处理，获得PCR模板；
(2)设计特异性引物，利用步骤(1)获得的PCR模板进行PCR扩增；
(3)将PCR扩增产物电泳分离，染色成像，根据成像结果判定蚕卵样本中是否含有家蚕微粒子虫。
9.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述特异性引物为：
正向引物：5′-ATAAATCGGAGGGCAAAT-3′；
反向引物：5′-TAAGCCGCACAATCCAC-3′。
10.如权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增的参数为：预变性95℃，5min；变性95℃，0.5min，退火48.3℃，0.5min，延伸72℃，1min，循环35次；延伸72℃，5min。
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