[发明专利]一种麦饭石载体海参抗溶藻弧菌剂的制备方法

权利要求书

1.一种麦饭石载体海参抗溶藻弧菌剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）增菌：从溶藻弧菌标准菌株的单一菌落中，挑取一菌环，接种到营养肉汤培养基中，3-5%的体积比接种，进行发酵，32~37℃培养24~48h，至菌悬液菌含量的终浓度为10⁷~10¹⁰cfu/g；制得发酵产物；

（2）洗涤：将步骤（1）获得的发酵产物，以1:50的质量比与PBS缓冲液混合，充分搅拌1~5min后，以4000~8000rpm转数离心2~5min，以收集菌体；

（3）灭活处理：在收集的菌体中，按1:50的质量比加入PBS缓冲液，再向混合液体中，按1：1000~4000重量比加入β-丙内脂，100rmp振摇条件下，于4℃放置24h，然后于37℃放置2小时使其水解；

（4）干燥：上述步骤（3）所得的灭活产物喷雾干燥到营养饲料中，干燥24~36h，灭活产物与营养饲料总重量比为1：2~10，产物水份含量为2~5%，制得海参用抗溶藻弧菌营养增强剂；

所述的营养饲料为：黄粉虫沙50～70份；马尾藻粉：25～40份；海蒿子15～35；大豆蛋白10～15份；鱼粉：5～10份；螺旋藻2～5份；贻贝粉2～5份；低聚壳聚糖：1～4份；复合多维1～4份；复合多矿1～4份；

（5）向步骤（4）所得到的海参用抗溶藻弧菌营养增强剂中，按照1:1~4的质量比，加入麦饭石，充分混合均匀后球磨，球磨条件为：按10~30：1的质量比装入钢球和沉淀物；球磨转速设为350~450r/min，球磨时间为2~4h，使得终产物的产品粒度为纳米级~微米级。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，其步骤包括菌种复苏的步骤：溶藻弧菌标准菌株菌落接种在肉汤培养基中，或者溶藻弧菌培养基中，36±1℃培养16~24h。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的溶藻弧菌培养基，其配制方法如下：

①取亮氨酸15g溶解于100mL蒸馏水中，过滤除菌；

②取酵母浸膏3g，氯化钠10g，胆酸钠2g，柠檬酸铁1g，硫代硫酸钠10g，氯化钙1g，蒸馏水900mL，121℃下灭菌20min；

③待所述培养基逐渐冷却后，加入除菌的亮氨酸溶液；

④调节所述溶液的pH至8.0左右，冷却放入15℃培养箱中备用。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，按1：4000重量比加入β-丙内脂。