[发明专利]利用免疫层叠法进行可溶性靶物质的检测方法

权利要求书

1.一种利用免疫层叠法进行可溶性靶物质的检测方法，其特征在于：它包括如下步骤：

（1）向血清中加入实验试剂进行基础免疫实验，所述基础免疫实验为免疫层叠实验的第一次免疫反应，所述实验试剂为基础免疫实验的实验试剂，所述基础免疫实验为放射免疫实验、高敏感性乳胶凝集试验、固相酶联免疫实验、化学发光免疫实验、电化学发光免疫实验、时间分辨免疫荧光实验或光激发化学发光类免疫实验之中任一种实验；

（2）对步骤1试验过程中所产生的实验信号进行检测，检测出的实验信号依据靶物质浓度与实验信号的函数关系，确定低浓度段靶物质含量， 所述低浓度段为基础免疫实验检测所取得的定量范围：

（3）在步骤(1)结束后，通过向第一次免疫反应后的反应体系中定量加入抗He试剂，进行至少一次的叠加免疫实验；抗He试剂为溶解于水中的能与靶物质特异性结合的抗体或抗原，所述抗体或抗原游离于水中或吸附在悬浮于水中的固相载体上，抗He试剂中抗体浓度为0.05～1000 μg/ml，或抗原浓度为0.01～500 μg/ml，加入抗He试剂体积与基础免疫实验结束时实验体系的体积比例为1：1～20； 

（4）对步骤3实验过程中所产生的实验信号进行检测，检测出的实验信号依据靶物质浓度与实验信号的函数关系，确定高浓度段靶物质含量；所述高浓度段为叠加免疫实验检测所取得的能够定量的检测范围：

（5）取基础免疫实验能精确反应靶物质浓度的上限值为叠加免疫实验结果靶物质浓度取值的下限值，将叠加免疫实验的下限值以上部分的实验结果与基础免疫实验上限值以下部分的实验结果进行交汇叠加；形成新的靶物质含量与实验信号强度的关系，并据此计算待测标本中的靶物质浓度。

2.根据权利要求1所述的利用免疫层叠法进行可溶性靶物质检测的方法，其特征在于：所述步骤（1）中的实验试剂为包被有anti-HBs的发光微球、生物素化的anti-HBs和包被链亲和素的感光微球；所述步骤（3）中抗He试剂的抗体为抗HBs；所述步骤（3）中向第一次免疫反应后的反应体系中定量加入抗He试剂进行叠加免疫实验是在37℃下温育5～60min，所述的抗He试剂中抗HBs浓度为100～750 μg/ml，其加入体积为5～50μL/孔；加入体积与一次免疫反应终末体系的比例为1：5～20。

3.根据权利要求1所述的利用免疫层叠法进行可溶性靶物质检测的方法，其特征在于：所述步骤（1）中的实验试剂为包被有anti-HBe的发光微球、生物素化的anti-HBe和包被链亲和素的感光微球；所述步骤（3）中抗He试剂的主要免疫反应物质为抗HBe致敏的乳胶溶液；所述步骤（3）中向第一次免疫反应后的反应体系中定量加入抗He试剂进行叠加免疫实验是在37℃下温育5～60min，所述的抗He试剂中抗HBe标记乳胶的质量浓度为0.5～2.0%，其加入体积为5～50μL/孔；加入体积与基础免疫反应终末体系的比例为1：5～20。 

4.根据权利要求1所述的利用免疫层叠法进行可溶性靶物质检测的方法，其特征在于：所述步骤（1）中的实验试剂为抗人IgE抗体包被微孔板条、銪标记抗-hIgE、洗涤液和发光促进剂；所述步骤（3）中抗He试剂的主要免疫反应物质为抗人IgE致敏乳胶；所述步骤（3）中向第一次免疫反应后的反应体系中定量加入抗He试剂进行叠加免疫实验是在37℃下温育5～60min，所述的抗He试剂中抗人IgE标记乳胶的质量浓度为0.1～1.0%，其加入体积为5～50μL/孔；加入体积与基础免疫反应终末体系的比例为1：1～10。

5.根据权利要求1所述的利用免疫层叠法进行可溶性靶物质检测的方法，其特征在于：所述步骤（1）中的实验试剂为包被有anti-IL-6的酶标反应板、酶标记anti-IL6、洗涤液、底物A及B，分别含TMB与H₂O₂和固定剂；所述步骤（3）中抗He试剂的主要免疫反应物质为抗人IL-6致敏乳胶；所述步骤（3）中向第一次免疫反应后的反应体系中定量加入抗He试剂进行叠加免疫实验是在37℃下温育5～60min，所述的抗He试剂中抗IL-6标记乳胶的质量浓度为0.1～1.0%，其加入体积为5～50μL/孔；加入体积与基础免疫反应终末体系的比例为1：1～10。