[发明专利]葡萄糖脱氢酶法检测葡萄糖的试剂盒及制备方法

说明书

技术领域

本发明属于一种含有酶的葡萄糖检测试剂盒，特别是涉及一种葡萄糖脱氢酶法检测葡萄糖的试剂盒及制备方法。 

背景技术

葡萄糖的测定方法已知的就有12种之多，在这些方法中，有的方法易受反应液中还原性物质、其它糖类干扰而产生或高或低偏差而很少应用。目前，国内外临床实验室检测葡萄糖最常用的方法是酶法，以酶为试剂可以提高特异性，葡萄糖氧化酶法易受维生素C、尿酸、尿素、胆红素、肌酐的干扰，而以上各物质对葡萄糖脱氢酶法无干扰。目前各实验室使用的葡萄糖脱氢酶法试剂盒，虽生产厂家不同，但试剂盒的组成基本相似，缓冲液内含有葡萄糖脱氢酶、变旋酶、NAD⁺或NADP⁺、防腐剂。 

下面是《全国临床检验操作规程》葡萄糖脱氢酶法试剂盒配方 

《全国临床检验操作规程》第三版中配方： 

使用方法：样品∶试剂＝1∶100，混匀后7分钟检测。 

葡萄糖脱氢酶法(GDH)法检测葡萄糖的过程为：葡萄糖脱氢酶催化葡萄糖脱氢，与NAD⁺氧化生成葡萄糖酸(D-葡萄糖糖酸-δ-内酯)和NADH。 

反应液中加入变旋酶可缩短反应到达平衡的时间，在反应过程中，NADH的生成量与葡萄糖浓度呈正比关系。 

在肝转移癌、恶性贫血、急性心肌梗塞患者中，血液中LDH、α-HBDH活性都升高，同时伴有丙酮酸、α-酮丁酸升高，用葡萄糖脱氢酶法测定其葡萄糖时，一旦有NADH生成，它将会产生如下干扰反应：在LDH催化下，NADH与丙酮酸反应，生成L-乳酸和NAD+，如反应方程式(1)；在α-HBDH催化下，NADH与α-酮丁酸反应生成α-羟丁酸和NAD+，如反应方程式(2)。干扰反应不同程度地消耗了NADH，有时甚至会耗尽生成的NADH，使反应曲线下降或变为平坦，使NADH的生成与葡萄糖不成等量关系，干扰反应的结果使葡萄糖测定结果偏低，LDH、α-HBDH活性越高，干扰反应速度越快，偏差越大。葡萄糖脱氢酶法测定心肌酶升高患者的葡萄糖，内源性干扰可通过与葡萄糖氧化酶法比较而被发现，葡萄糖脱氢酶法测定葡萄糖结果明显偏低，也可以通 过在自动化分析仪上查看实时反应曲线获知，心肌酶活性越高，样品体积分数增加，内源性干扰越大，反应曲线下降越陡，葡萄糖结果偏差越大，准确度越低。 

葡萄糖脱氢酶法测定原理及消除干扰如图6所示。 

在测定肝转移癌、恶性贫血、急性心肌梗死病人血清时，随着样品体积分数(SVF，样品与试剂使用比例)的改变，反应液中LDH及丙酮酸、α-HBDH及酮丁酸浓度随着改变。SVF增大，准确度下降(内源性干扰反应)、精密度也下降(因反应尚未达到终点，反应持续进行)，特别是在测定血清中LDH、α-HBDH酶活性高的患者葡萄糖时，其结果偏低。SVF降低，对低葡萄糖标本，仪器分析中的信噪比(噪音/信号)增大，会导致结果重复性下降，精密度CV下降。 

发明内容

本发明为了解决现有技术中葡萄糖脱氢酶法测定葡萄糖存在内源性干扰的问题，提供一种抗内源性干扰，提高临床实验室采用葡萄糖脱氢酶法测定葡萄糖准确性的试剂盒及制备方法。 

为了解决上述技术问题，本发明的葡萄糖脱氢酶法检测试剂盒包括：4瓶葡萄糖脱氢酶法试剂及1支葡萄糖标准液，其特征在于试剂中120.0mmol/L浓度的磷酸盐缓冲液溶解草酸盐8.0mmol/L、葡萄糖脱氢酶6000U/L、变旋酶180U/L、NAD⁺4.0mmol/L、适量的防腐剂。 

所述的草酸盐为分析纯的草酸钠、草酸钾。 

所述的葡萄糖标准液浓度为5.55mmol/L。 

所述的防腐剂为ProClin300。 

一种葡萄糖脱氢酶法检测葡萄糖的试剂盒制备方法： 

a.磷酸盐缓冲液(PH7.5)120.0mmol/L浓度的磷酸盐缓冲液的制备方法：称取96g NaCl、2.4g KCl、17.3g Na₂HPO₄和2.88g KH₂PO₄，溶于800ml蒸馏水中，调节pH值，最后加蒸馏水定容至1L即可。