[发明专利]锦灯笼宿萼皂苷在制备抗肿瘤药物中的应用

说明书

摘要

本发明提供了以锦灯笼宿萼皂苷为活性成分的药物，其可单独与药用辅料或与其它药物联合制备成药物，本发明还提供了其在制备药物方面的应用，具体地提供了其在制备抗肿瘤药物方面的应用。

背景技术

锦灯笼(Physalis alkekengi,L.var.francheti(Mast.) Makino )又名红姑娘、挂金灯、红灯笼、灯笼果,为茄科(Solanaceae)酸浆属植物,广泛分布于欧亚大陆,如俄罗斯、中国、日本以及朝鲜等国家。锦灯笼为带果实的宿萼,秋季果实成熟,果实球形、味甘、微酸,可作水果,营养丰富;宿萼微苦,成熟时呈红色或橙红色。锦灯笼果实不仅可以食用,而且是我国的传统中药。锦灯笼含有内酯类、黄酮类、萜类、生物碱类、甾醇类、氨基酸类及无机元素等几大类化学成分。已有的研究表明,锦灯笼有多方面的药理作用,如酸浆苦素B是锦灯笼的主要抗炎成分,常用于上呼吸道感染疾病的治疗;木犀草素对心血管系统、祛痰及体外抗柯萨奇均具较好疗效。然而有关锦灯笼宿萼皂苷抗肿瘤活性的研究尚未见报道，我们发现其抗肿瘤作用明显，是一种有开发前途的抗肿瘤药物。 

发明内容

本发明提供了锦灯笼宿萼皂苷在制备抗肿瘤药物方面的应用。 

本发明提供的化合物的制备方法为：将干燥的成熟锦灯笼宿萼粉碎,乙醇浸泡过夜;水浴回流提取,过滤,取上清,共提取3次;将3次的滤液合并,离心,取上清弃沉淀;将上清水浴旋转蒸发并回收乙醇.将上述上清液与配制好的水饱和正丁醇在分液漏斗上反复充分震荡混合,过夜;然后将下层水层放入烧杯中,正丁醇层保留,将水层重复上述萃取步骤两次;合并上层正丁醇层,旋转蒸发回收正丁醇至黏稠状;用少量甲醇溶解沉淀,加入乙醚洗涤,离心,洗涤数次至上清无色;沉淀物在真空干燥箱中干燥过夜得粗皂苷；将锦灯笼宿萼粗皂苷配制成10 mg/mL的水溶液,充分溶解、离心后,将上清液上样于大孔树脂层析柱洗脱:首先用蒸馏水洗脱,将洗脱液进行薄层层析(TLC)检测,直至硅胶G薄层层析检验没有显色反应为止，洗脱至无寡糖存在;然后以乙醇溶液进行洗脱,将洗脱液进行三氯醋酸显色,直至无颜色反应，将洗脱液旋转蒸发浓缩至一定体积,水浴蒸发去除存留的少量乙醇后,将浓缩液冰冻干燥,即得分离纯化后的锦灯笼宿萼皂苷。 

本发明提供的含有化合物的药物，可以通过将化合物添加药学上可接受的辅料或可选的其它成分而制成适于临床使用的药物组合物。 

本发明的化合物在制备治疗肿瘤药物中的应用，是通过以下的药效实验得到证实的。 

具体实施方式

制备例1：锦灯笼宿萼皂苷的制备 

取600g干燥的成熟锦灯笼宿萼粉碎,加入70%的乙醇,浸泡过夜;60℃水浴回流提取2 h,过滤,取上清,共提取3次;将3次的滤液合并,3 500 r/min离心10 min,取上清弃沉淀;将上清水浴旋转蒸发并回收乙醇.将上述上清液与配制好的水饱和正丁醇在分液漏斗上反复充分震荡混合,过夜;然后将下层水层放入烧杯中,正丁醇层保留,将水层重复上述萃取步骤两次;合并上层正丁醇层,旋转蒸发回收正丁醇至黏稠状;用少量甲醇溶解沉淀,加入5倍乙醚洗涤,3 000 r/min离心15 min,洗涤数次至上清无色;沉淀物在真空干燥箱中干燥过夜得粗皂苷；将锦灯笼宿萼粗皂苷配制成10 mg/mL的水溶液,充分溶解、离心后,将上清液上样于D-101大孔树脂层析柱(4 cm×40 cm),静止0.5 h后进行洗脱.洗脱:首先用蒸馏水洗脱,将洗脱液进行薄层层析(TLC)检测,直至硅胶G薄层层析检验没有显色反应为止(薄层层析方法:用正丁醇-甲酸-水(4∶6∶1,体积比)为展开剂,5%硫酸乙醇溶液为显色剂,100℃条件下2 min即可显色),洗脱至无寡糖存在;然后以60%的乙醇溶液进行洗脱,将洗脱液进行三氯醋酸显色,直至无颜色反应，将洗脱液旋转蒸发浓缩至一定体积,水浴蒸发去除存留的少量乙醇后,将浓缩液冰冻干燥,即得分离纯化后的锦灯笼宿萼皂苷。

实验例1：锦灯笼宿萼皂苷对体外肿瘤细胞的抑制作用 

材料和试剂

药物及试剂：

锦灯笼宿萼皂苷，白色粉末，按照制备例1方法制备；

注射用硫酸长春新碱 ,上海华联制药有限公司，规格1mg/支；

RPMI1640培养基：GIBCO公司生产；

新生牛血清（超级），杭州四季青生物工程材料有限公司；

胰蛋白酶，Sigma公司生产；

磺基罗丹明B（sulforhadamine B, SRB），Sigma公司；