[发明专利]一种Hydramacin-1抗菌肽突变体及其制备方法

权利要求书

1.一种Hydramacin-1抗菌肽突变体，所述突变体具有如Seq ID No.10所述的氨基酸序列，其中所述的第八个氨基酸X₁为天冬氨酸（D）、谷氨酸(E)或丝氨酸(S)。

2.根据权利要求1所述的Hydramacin-1抗菌肽突变体，其特征在于：所述序列中第八个氨基酸X₁为天冬氨酸（D），该突变体具有如Seq IDNo.8所述的氨基酸序列。

3.编码如权利要求1所述的Hydramacin-1抗菌肽突变体的基因，所述的基因序列具有如Seq ID No.9所述的核苷酸序列，其中第22-24位的核苷酸N₁N₂N₃为分别编码天冬氨酸（D）、谷氨酸(E)或丝氨酸(S)的密码子。

4.根据权利要求3所述的基因，其特征在于：所述的基因序列中第22-24位的核苷酸N₁N₂N₃为为编码天冬氨酸（D）的密码子，该基因具有如Seq ID No.7所述的核苷酸序列。

5.带有如权利要求3-4任一项所述基因序列的载体。

6.根据权利要求5所述的载体，所述的载体选自酵母表达载体pPICZ-α-A、pHIL-D₂、pPIC9或pHIL-S₁，动物细胞表达载体pSVK3或pMSG。

7.根据权利要求6所述的载体，所述的载体为酵母表达载体pPICZ-α-A。

8.一种宿主系统，其由权利要求5所述的载体经转化或转染原核生物或真核生物宿主得到。

9.一种制备如权利要求1所述Hydramacin-1抗菌肽突变体蛋白的方法，包括如下步骤：

（1）、在Hydramacin-1抗菌肽突变体基因的两端引入限制性酶切位点，通过酶切操作连接到酵母表达载体上;

（2）、将表达载体转化导入酵母菌中，经筛选得到重组基因工程菌；

（3）、高密度发酵重组酵母菌，诱导表达后离心收集发酵上清液，经分离纯化获得重组Hydramacin-1抗菌肽突变体蛋白。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述方法步骤（1）中，在Hydramacin-1抗菌肽突变体基因前端加入限制性内切酶XhoI的酶切位点，后端加入限制性内切酶XbaI的酶切位点，并在限制性内切酶XbaI的酶切位点前端连续加入两个终止密码子。