[发明专利]制备塔格糖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及D-塔格糖的制备方法，具体利用涉及利用嗜酸乳杆菌转化半乳糖合成D-塔格糖的方法。 

背景技术

随着现代生活水平的提高，人体的糖摄入量也在不断增加，而由此带来的健康问题也日益凸显，尤以肥胖、糖尿病及龋齿为主，因此研发低热量的甜味剂以替代蔗糖正在引起人们的重视。D-塔格糖是是一种自然界中少量存在的稀有糖，是果糖和D-半乳糖的异构体。D-塔格糖理化性质稳定，无任何不良异味，甜度约为蔗糖的92%，而热量仅为蔗糖的1/3左右（蔗糖4kcal/g,D-塔格糖1.5kcal/g），同时药理学和毒理学研究证明D-塔格糖具有改善肠道菌群、降低血糖、防止龋齿等多种益生功效，用于人体安全、无毒。2001年4月，美国FDA确定D-塔格糖为公认安全食品（GRAS），随后，韩国、澳大利亚、新西兰、欧盟都批准D-塔格糖用于食品。联合国粮农组织（FAO）和世界卫生组织（WHO）联合食品添加剂委员会（JECFA）2004年57次会议批准D-塔格糖作为食品添加剂。另外，美国Spherix公司将D-塔格糖用于治疗Ⅱ型糖尿病，目前正在进行三期临床。 

D-塔格糖的生产方法包括自然分离、化学催化和生物转化。由于D-塔格糖的含量在自然界中的含量较为稀少，因此自然分离方法用于工业规模生产塔格糖是不可行的。化学催化合成D-塔格糖存在副反应多、杂质多、难以分离、安全性不高等诸多问题。目前生物转化合成D-塔格糖主要是通过基因工程手段在大肠杆菌内表达耐热L-阿拉伯糖异构酶，然后将酶纯化并固定化以催化D-半乳糖生成D-塔格糖来进行，该方法存在稳定性较差、成本高的问题。此外，由于宿主菌采用大肠杆菌，用于人体直接服用的产品生产时存在一定的风险。除利用重组大肠杆菌生产D-塔格糖外，专利CN200610085922.2公开了一种利用乳酸菌发酵生产D-塔格糖的方法，但是发酵法往往存在杂质较多、含量较低且不稳定的问题，该方法最高产率 为450mg/100mL。 

因此，为解决上述现在D-塔格糖生产技术存在的问题，建立一种高效、经济、环保的D-塔格糖生产方法是非常有意义的。 

发明内容

本发明的目的是提供一种有效的D-塔格糖的制备方法。 

本发明一方面提供了一种制备D-塔格糖的方法，所述方法包括以下步骤： 

（1）用嗜酸乳杆菌CCTCC M98004催化半乳糖得到D-塔格糖。 

在本发明的一个优选实例中，所述方法还包括用培养基培养嗜酸乳杆菌CCTCC M98004的步骤。 

在本发明的一个优选实例中，所述方法还包括将嗜酸乳杆菌CCTCC M98004制备成静息状态菌体的步骤。 

在本发明的一个优选实例中，所述方法还包括将嗜酸乳杆菌CCTCC M98004制备成固定化菌体的步骤。 

在本发明的一个优选实例中，所述方法包括以下步骤： 

（1）用培养基培养嗜酸乳杆菌CCTCC M98004； 

（2）将步骤（1）的培养后的嗜酸乳杆菌CCTCC M98004制备成静息状态菌体和/或固定化菌体；以及 

（3）用步骤（2）得到的静息状态菌体和/或固定化菌体催化半乳糖得到D-塔格糖。 

在本发明的一个优选实例中，在催化半乳糖得到D-塔格糖的步骤中可加入硼酸或硼酸盐。 

在本发明的一个优选实例中，所述硼酸盐选自硼酸碱金属盐和二价金属阳离子的硼酸盐。 

在本发明的一个优选实例中，催化半乳糖得到D-塔格糖时的温度为40-90℃，较好为50-80℃，更好为60-70℃，最好为60-65℃。 

在本发明的一个优选实例中，催化半乳糖得到D-塔格糖时的时间为1-100小时，较好为10-80小时，更好为24-72小时，最好为48小时。 

本发明另一方面提供了嗜酸乳杆菌CCTCC M98004在制备D-塔格糖中的用途。 

本发明所述的方法可有效地制备D-塔格糖。 

附图说明

图1表示HPLC检测D-塔格糖含量(A为D-半乳糖和D-塔格糖标准品图；B为实施例1所示静息状态菌体检测塔格糖结果)。 

图2表示实施例2所示反应温度和时间对固定化菌体催化合成D-塔格糖的影响。 

图3表示固定化菌体连续批次催化合成D-塔格糖。 

具体实施方式

在本发明中，如果没有特别的说明，百分数（％）或者份都指相对于组合物的重量百分数或者重量份。