[发明专利]一种检测自身免疫肝病相关自身抗体谱的试剂盒的膜条的制备方法及其构成的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种诊断疾病的试剂盒，具体地，涉及一种检测自身免疫肝病相关自身抗体谱的试剂盒的膜条的制备方法及其构成的试剂盒。

背景技术

自身免疫性肝病是一类病因不明的慢性进行性肝脏疾病，与自身免疫反应密切相关，早期临床表现隐匿，难以与慢性病毒性肝炎区分，而这两种疾病的治疗方式有很大的不同。若治疗不当最终可发展为肝纤维化和肝硬化，只能通过肝移植延长患者生命。因此，自身免疫性肝病早期诊断和鉴别诊断是十分迫切和必要的。自身免疫性肝病都有特异性的抗体，是用于早期诊断和鉴别诊断疾病的重要的依据。

常见的自身免疫性肝病有自身免疫性肝炎（AIH），原发性胆汁性肝硬化（PBC）等。AIH的特征性的自身抗体有：抗LKM-1、LC-1、SLA和F-actin的抗体；PBC的特异性的自身抗体有抗AMA/M2、gp210、Sp100的抗体。

对于自身免疫疾病诊断方法多采用间接免疫荧光分析法（IFA）、酶联免疫吸附法〔ELISA)和免疫印迹，但各有其不足。间接免疫荧光分析法是检测自身抗体的常用技术。其实验基质一般是鼠肝片或猴肝片，含有完整的抗原谱，适合筛查试验。但是有如下缺点：不能作为确诊依据；结果的判断需要有丰富的经验；滴度的意义大于核型，但滴度的判定主观性强；灵敏度较低，特异性也不高。

酶联免疫吸附法(ELISA)具有灵敏度高，可作为筛选实验，也可作为确诊依据，还可定量测定，检测病情和治疗效果。但一次试验只能检测单一指标，通量低，检测成本较高，在自身免疫疾病的诊断应用推广方面存在着极大的局限性。Western blot（WB）是在凝胶电泳和免疫分析技术基础上发展起来的一种免疫检测技术，具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性的优点，比较适合发现未知的抗体。而对于检测已知的抗体，由于使用了天然的混合抗原，实验过程中经常出现找不到目标条带和条带偏移的问题，给结果的判读造成了不少困难，极易误判和漏判。同时WB使用时间长，也不适合在临床检验中推广。有人将WB改进，直接将纯化抗原包被于硝酸纤维素膜上，然后进行免疫反应检测抗体，形成了改良的免疫印迹方法，但目前还没有将该方法用于检测自身免疫肝病的3种自身抗体的应用。

对于现有的试剂盒，存在下述缺点：

1、WB使用时间长，操作复杂。

2、WB使用了天然的混合抗原，实验过程中经常出现找不到目标条带和条带偏移的问题，给结果的判读造成了不少困难，极易误判和漏判。

3、ELISA方法一次只能检测一个项目，效率不高。

4、IFA方法仅能进行筛查，不具有辅助诊断的意义。

5、目前还没有能同时检测自身免疫肝病相关的7种自身抗体的改良免疫印迹方法。

6、目前的试剂盒中，一般没有对照线或者一个对照线只能作为一个检测结果对照，没有能够同时至少作为2个检测结果对照的质控带。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种检测自身免疫肝病相关自身抗体谱的试剂盒的膜条的制备方法及其构成的试剂盒。采用该方法制备的膜条及具备该膜条的试剂盒，可以同时对两个乃至更多的检测条带（检测结果）起到对照判读的作用。