[发明专利]一种大白菜eIF(iso)4E.c位点碱基缺失突变的特异性分子标记及其应用有效
| 申请号： | 201210455275.5 | 申请日： | 2012-11-13 |
| 公开（公告）号： | CN102925437A | 公开（公告）日： | 2013-02-13 |
| 发明（设计）人： | 刘栓桃;赵智中;卢金东;张志刚;李巧云 | 申请（专利权）人： | 山东省农业科学院蔬菜研究所 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 济南圣达知识产权代理有限公司 37221 | 代理人： | 彭成 |
| 地址： | 250100 山东*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 大白菜 eif iso 碱基 缺失 突变 特异性 分子 标记 及其 应用 | ||
1.一种大白菜eIF(iso)4E.c位点碱基缺失突变的特异性分子标记，其特征在于：与野生型位点检测相关的标记命名为ASM-W，片段大小128bp，如SEQ ID No.1所示；对应的碱基缺失突变位点检测相关的标记命名为ASM-m，片段大小124bp，如SEQ ID No.2所示。
2.权利要求1所述的大白菜eIF(iso)4E.c位点碱基缺失突变的特异性分子标记的引物，其特征在于：引物序列如下：
正向引物PF1：5'-CGAAGAAGAATATGGCGACAGA-3'；
PF2：5'-ACATTCACATGTTCAAAGCTGGTGTT-3'；
反向引物PR1：5'-CTATTCTCTTGCATTGTTTGAGCG-3'；
PR2：5'-AGTTTCAAGCCAAGCCTTGTCTAAAG-3'；
如SEQ ID NO.3、4、5、6所示。
3.权利要求1所述的大白菜eIF(iso)4E.c位点碱基缺失突变的特异性分子标记在鉴别大白菜eIF(iso)4E.c基因位点的基因型中的应用。
4.权利要求2所述的引物在鉴别大白菜eIF(iso)4E.c基因位点的基因型中的应用。
5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于：具体应用方式为：利用（PF1+PR1）组合和（PF2+PR2）组合这两套引物组合对待测个体的基因组DNA进行两次PCR扩增，检测扩增片段的大小，如果扩增出128bp的条带，则为野生型；扩出124bp的条带则为突变型；如果同时扩出两条带，则为杂合型。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述PCR扩增具体为：在20μl反应体系中，包含1×TransStart FastPfu buffer；20ng的基因组DNA；0.4μM正反向引物；0.25mMdNTPmix；1个单位的TransStart FastPfu DNA聚合酶；
PCR循环条件：95℃预变性5分钟；接着是95℃变性30秒，57.5℃退火30秒，72℃延伸40秒，35-38个循环，最后72℃延伸10分钟。
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