[发明专利]日本柳杉COR基因及其用途

权利要求书

1.日本柳杉COR基因，其特征是：该COR基因为SEQ ID NO:1所示的序列。

2.编码如权利要求1所述日本柳杉COR基因的蛋白质，其特征是：该蛋白质为SEQ ID NO:2所示的序列。

3.如权利要求1所述的日本柳杉COR基因的克隆方法：利用模式植物拟南芥的数据库与日本柳杉的EST序列数据库进行大规模序列联配，根据联配结果设计引物，然后进行电子PCR过程设计出杉科的ACGM标记；

在设计出的ACGM标记中选择出能够扩增日本柳杉COR基因保守区片段的引物，引物序列为：

TA41F：5' GGACGCCAAGAGAAGAAAGA 3'

TA41R：5' ACACACCACGCATACAATCC 3'

进行PCR反应，扩增出250bp左右的片段，扩增产物于1%琼脂糖凝胶上电泳，确定产物单一明亮后，测序；

以获得的序列为靶序列，用3'RACR和5'RACE试剂盒分别对其3'和5'末端未知序列进行扩增，测序，根据测序结果设计全长引物，扩增出基因全长；引物序列如下：

3GSP1   AGGAAGATTACGGTCATGG   3'RACE

3GSP2   TGAGAAGAAGGGCCTGATG   3'RACE

5GSP1   CCATGACCGTAATCTTCCT       5'RACE

5GSP2   CATCAGGCCCTTCTTCTC       5'RACE

QCF   ATGGCGGAAGAAAATGCACC    全长

QCR   TCAGTCTTTCCATGACCGTA     全长。

4.一种阳性重组质粒pCAMBIA-2300-CajCOR，其特征是：将日本柳杉COR基因（回收的CjCOR基因片段）插入pCAMBIA-2300质粒中，阳性重组质粒命名为pCAMBIA-2300-CajCOR。

5.如权利要求1所述的日本柳杉COR基因的用途，其特征是：增强植物的耐低温能力。

6.如权利要求1所述的日本柳杉COR基因的用途，其特征是：通过转基因获得具有耐低温能力的植物。

7.根据权利要求5或6所述的日本柳杉COR基因的用途，其特征是：所述植物为水稻、玉米、棉花、大豆、烟草、油菜、大麦、小麦或高粱。