[发明专利]转基因植物材料消化率的体外测定方法

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域及蛋白鉴定及检测领域技术领域，尤其涉及表达的外源基因蛋白在外的消化率继续定量检测测定技术领域，特别是涉及一种转基因植物材料消化率的体外测定方法。

背景技术

地球上适于耕种的土地不足1％，其余为干旱、半干旱、冷土、沼泽和盐碱地等。尽管如此，理论上地球可以供养比现在多得多的人口，但是优良的土壤和良好的气候及良好的耕作条件在时空上分布不均匀，与人口分布更不相称。随着人口数量的增加，人类需要更多的粮食，这种需求因越来越多的土地非农田化、沙化、退化及气候变化引起的频繁自然灾害而更加严重；粮食问题已经是全球面临的严重问题，转基因生物就是解决人类粮食问题的有效途径之一。伴随着转基因生物的产生，转基因生物的食用与饲用安全评价技术与方法也应运而生，而对于转基因生物的安全性问题随着转基因生物的产生就一直没有停止过，尤其对于转基因生物的外源基因及其蛋白的生物安全性问题。虽然理论上任何食物中都存在DNA，在消化道系统中的DNA能被很好地消化吸收，这意味着DNA分子并无毒性，但转基因本身要受一些不确定因素的影响，进而还具有非预期性效应与结果，这种非预期性效应与结果也是所有人所不想看到，甚至是无法接受的风险，所以如何对转基因生物进行安全性评价问题就成为一个现实课题。

本申请人及其所在的课题组前期在国家转基因重大专项基金“转基因生物食用饲用安全性评价技术研究”(2008ZX08011-005；2010ZX08011-005；2013ZX08011-005)择优滚动项目的资助下，对转基因生物的饲用安全性从转基因生物对动物营养、免疫、微生态和残留四个方面进行了系统研究，其中营养、免疫和微生态都是从转基因生物对试验动物性能、形态、功能进行对比研究，而残留研究也仅在DNA水平上(PCR检测)进行了定性的检测。而众所周知的过敏与变态反应就是在蛋白水平上的反应，蛋白水平上也是衡量其安全性的一个重要方面，所以本发明是一个对转基因生物表达的外源蛋白定量水平上(即检测转基因生物外源蛋白在动物消化道的各段的消化率)的一个方法。

此外，涉及转基因植物材料中，现有技术大都涉及大豆分离蛋白是以低温脱溶大豆粕为原料生产的一种全价蛋白类食品。蛋白质含量在90％以上，氨基酸种类有近20种，并含有人体必需氨基酸。其营养丰富，不含胆固醇，近年的研究证实，大豆蛋白具有肉类蛋白所不具有的保健价值，是植物蛋白中为数不多的可替代动物蛋白的品种之一，对维系人类生命和保证人们的健康起着重要作用。但大豆蛋白分子结构紧密，对酶解具有很强的抵抗力，不利于人体内的消化和吸收，其生理活性和消化性是开发大豆蛋白加工技术的主要难题。因此，测定蛋白在人体内的消化率对提高和改善大豆蛋白加工难题具有重要的现实意义。

目前对蛋白质消化的研究方法主要有化学法分析、体内消化法(人体及动物实验法)和体外模拟法等。化学分析法快速简便，但这种利用概略养分分析所测得的蛋白养分与人体消化吸收养分间存在很大差异，不足以准确地反映出蛋白的实际营养价值。体内消化法(人体及动物实验法)是测定蛋白质消化最好的方法，但是这种方法复杂、时间长、费用高；且由于很多因素影响而很难做到。与前两种方法相比，体外模拟法具有快速、简便、重复性好等优点，虽体内消化过程难以精确再现，但是，存在于体内的条件是可以在体外再现的。通过对体内真实情况的模拟，能很好的反映食物在体内消化吸收，可在短时间内对多个样品进行评定。