[发明专利]测定ADAMTS-13蛋白酶的方法有效
申请号: | 201210447324.0 | 申请日: | 2008-07-03 |
公开(公告)号: | CN103076459A | 公开(公告)日: | 2013-05-01 |
发明(设计)人: | 哈拉尔德·阿尔特豪斯;托比亚斯·奥布斯尔;于尔根·帕茨克;赖因哈德·施内彭海姆 | 申请(专利权)人: | 西门子医学诊断产品有限责任公司 |
主分类号: | G01N33/86 | 分类号: | G01N33/86;C12Q1/37 |
代理公司: | 北京康信知识产权代理有限责任公司 11240 | 代理人: | 李慧 |
地址: | 德国*** | 国省代码: | 德国;DE |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 测定 adamts 13 蛋白酶 方法 | ||
1.一种在一样本中测定ADAMTS-13蛋白酶的血管性血友病因子(VWF)裂解活性的方法,其包括下列步骤:
a)将所述可能包含ADAMTS-13蛋白酶的样本与用作基质的分离VWF混合成一反应标本,
b)培养所述反应标本,以及
c)测定所述反应标本中的残留VWF活性,
其特征在于,
所述VWF基质由大分子多聚体VWF构成,所述大分子多聚体VWF包含有具有至少一处氨基酸序列变异的VWF单体,所述氨基酸序列变异使得所述VWF基质与大分子多聚体VWF是由野生型VWF单体构成的VWF基质相比,可以加速ADAMTS-13的分解作用。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,
所述由大分子多聚体VWF构成的VWF基质的VWF单体具有至少一处来自下列群组的氨基酸序列变异:P1648S、E1638K、G1505R、S1506L、M1528V、R1569del、R1597W、V1607D、G1609R、G1629E、G1631D、R1597Q、V1499E和Y1584C。
3.根据权利要求1或2中任一项权利要求所述的方法,其中,
所述大分子多聚体VWF基质是用重组法制成。
4.根据权利要求1或2中任一项权利要求所述的方法,其中,
所述大分子多聚体VWF基质是从适当VWF氨基酸序列变异的杂合或纯合载体的捐献者血浆中分离而得。
5.根据权利要求1至4中任一项权利要求所述的方法,其中,
在步骤a)中再将所述样本与肝磷脂混合。
6.根据权利要求1至5中任一项权利要求所述的方法,其中,
在步骤a)中再将所述样本与分离天然GPIbα蛋白和/或重组野生型GPIbα蛋白以及瑞斯托霉素或美洲矛头腹毒蛋白混合。
7.根据权利要求1至5中任一项权利要求所述的方法,其中,
在步骤a)中再将所述样本与包括一氨基酸序列的重组或合成GPIbα蛋白混合,所述氨基酸序列与人类GPIbα蛋白的野生型序列(SEQ ID NO:1)相比至少包含氨基酸残基1-268,且分别在位置233和239上具有一个氨基酸取代基Xaa。
8.根据权利要求7所述的方法,其中,
所用GPIbα蛋白的位置233和/或位置239上的氨基酸取代基Xaa由缬氨酸残基或丝氨酸残基构成。
9.根据权利要求1至5中任一项权利要求所述的方法,其中,
在步骤c)中通过测量瑞斯托霉素辅因子活性来测定所述反应标本中的残留VWF活性。
10.根据权利要求1至5中任一项权利要求所述的方法,其中,
在步骤c)中通过下面所述的方法来测定所述反应标本中的残留VWF活性:
其中,将所述反应标本和分离GPIbα蛋白混合成一检测标本,其中,
使用包括一氨基酸序列的分离GPIbα蛋白,所述氨基酸序列与人类GPIbα蛋白的野生型序列(SEQ ID NO:1)相比至少包含氨基酸残基1-268,且分别在位置233和239上具有一个氨基酸取代基Xaa,以及
不在所述检测标本中添加瑞斯托霉素和美洲矛头腹毒蛋白。。
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