[发明专利]测定ADAMTS-13蛋白酶的方法

权利要求书

1.一种在一样本中测定ADAMTS-13蛋白酶的血管性血友病因子（VWF）裂解活性的方法，其包括下列步骤：

a）将所述可能包含ADAMTS-13蛋白酶的样本与用作基质的分离VWF混合成一反应标本，

b）培养所述反应标本，以及

c）测定所述反应标本中的残留VWF活性，

其特征在于，

所述VWF基质由大分子多聚体VWF构成，所述大分子多聚体VWF包含有具有至少一处氨基酸序列变异的VWF单体，所述氨基酸序列变异使得所述VWF基质与大分子多聚体VWF是由野生型VWF单体构成的VWF基质相比，可以加速ADAMTS-13的分解作用。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，

所述由大分子多聚体VWF构成的VWF基质的VWF单体具有至少一处来自下列群组的氨基酸序列变异：P1648S、E1638K、G1505R、S1506L、M1528V、R1569del、R1597W、V1607D、G1609R、G1629E、G1631D、R1597Q、V1499E和Y1584C。

3.根据权利要求1或2中任一项权利要求所述的方法，其中，

所述大分子多聚体VWF基质是用重组法制成。

4.根据权利要求1或2中任一项权利要求所述的方法，其中，

所述大分子多聚体VWF基质是从适当VWF氨基酸序列变异的杂合或纯合载体的捐献者血浆中分离而得。

5.根据权利要求1至4中任一项权利要求所述的方法，其中，

在步骤a)中再将所述样本与肝磷脂混合。

6.根据权利要求1至5中任一项权利要求所述的方法，其中，

在步骤a)中再将所述样本与分离天然GPIbα蛋白和/或重组野生型GPIbα蛋白以及瑞斯托霉素或美洲矛头腹毒蛋白混合。

7.根据权利要求1至5中任一项权利要求所述的方法，其中，

在步骤a)中再将所述样本与包括一氨基酸序列的重组或合成GPIbα蛋白混合，所述氨基酸序列与人类GPIbα蛋白的野生型序列（SEQ ID NO:1）相比至少包含氨基酸残基1-268，且分别在位置233和239上具有一个氨基酸取代基Xaa。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，

所用GPIbα蛋白的位置233和/或位置239上的氨基酸取代基Xaa由缬氨酸残基或丝氨酸残基构成。

9.根据权利要求1至5中任一项权利要求所述的方法，其中，

在步骤c)中通过测量瑞斯托霉素辅因子活性来测定所述反应标本中的残留VWF活性。

10.根据权利要求1至5中任一项权利要求所述的方法，其中，

在步骤c)中通过下面所述的方法来测定所述反应标本中的残留VWF活性：

其中，将所述反应标本和分离GPIbα蛋白混合成一检测标本，其中，

使用包括一氨基酸序列的分离GPIbα蛋白，所述氨基酸序列与人类GPIbα蛋白的野生型序列（SEQ ID NO:1）相比至少包含氨基酸残基1-268，且分别在位置233和239上具有一个氨基酸取代基Xaa，以及

不在所述检测标本中添加瑞斯托霉素和美洲矛头腹毒蛋白。。